洁净区沉降菌监测标准操作规程(SOP)

原理：采用沉降法，即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子，经不少于48小时的培养，在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以菌落数来判定洁净环境内的活微生物  数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

主体内容：

1. 器材：

高压消毒锅：使用时严格按照说明书操作。

恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿：Φ90mm玻璃培养皿

培养基：营养琼脂

2. 操作程序

2.1 采样

将已制备好的培养平皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖盖上后倒置。

2.2 培养：

2.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

2.2.2 在30~35℃培养箱中培养，时间不少于48小时。

2.2.3 每批培养基应有对照实验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿做对照实验。

2.3 菌落记数

2.3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏。

2.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

2.4 注意事项

2.4.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。

2.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

2.4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

2.4.4 由于细菌  种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

2.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

3. 测试规则

3.1 测试状态

3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。

4.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。

3.2 测试人员

3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。

3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

3.3 测试时间

3.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

3.3.2 对非单向流，如10,000级，100,000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。

3.4 沉降菌计数

3.4.1 采样点数目及其布置

沉降菌测试的最少采样点数目可查表1确定。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。