流式细胞术公开课
会形成鞘液流(鞘液是为了保证细胞在中间形成单个排列的细胞流,因为要保证激光覆盖整个样本中心流)在外周,样本流在中央的层流状态,使得样本仅在轴心
激光照射到样本流上,激光60um宽,20um高(宽高有限,只有样本流刚好在中间才能保证激光能覆盖样本流细胞)
样本流中的细胞表面的荧光抗体受到激光的照射以后,会被激发出荧光;
有两个镜头接受荧光信号,
一个是forward scatter-FSC检测器(前向散射光),另一个是side scatter-SSC侧向轴检测器/荧光信号检测器(与激光90度)
收集到的光信号就被光纤传导到光分离系统中去了,
光信号手机系统的内圈是长通滤片
中圈和外圈分别是带通滤片和PMT(啥?)
刚才细胞经过激光照射会有四个重叠的光谱,x轴是波长,y轴是强度
第一步,通过长通滤片,光信号被切割
第二步,经过带通滤片把特定波长的波过滤过来,不符合波长条件的波被反射
第三步,经过过滤的波,经过PMT转变成电信号,
PMT元件是电信号检测分析系统,
左边是光电转换膜,上下两边有不同的小电极,
侧边有电子检测器,
光信号转换成电信号的过程:
光子打到左边的光电转换膜上----> 膜上就会蹦出一个电子,这样就初步实现了光信号转变成电信号 ----> 电信号经过不同的电极就会反弹 ----> 电子经过反弹,电信号实现级联放大作用(通过调整电压可以调整最终的电信号大小) -----> 检测器上就会形成一个电脉冲
表示电脉冲有三个参数:
峰宽+高度+峰下面积A;
常规的一般用峰下面积A来表示
下面是经过电信号转换的信号强度值,反映了每个荧光信号的强度;
每一行就是一个细胞,
每一行代表一个细胞,每一列的数值784~10229代表每个特定的PMT的荧光信号强度值;
两个PMT作为横纵坐标,可以根据荧光强度判定这两种荧光抗体结合细胞的比例;
一个细胞在轴上就是一个点,每一个点就代表一个细胞的位置,横纵坐标分别代表两个通道PMT的强度(选取的两个PMT);
从下图可以看到黑乎乎的一团代表一种细胞,但具体的数字并不知道,为了弥补这个缺点呢,就出现了密度图
细胞越多用不同的颜色(伪色)表示,可以看到红色中心的细胞最多,外周细胞少
把密度相等的点画成一条线
横轴代表荧光信号强度,纵轴代表细胞数量
导读几乎所有看似无限复杂的生物学都发生在三维空间中。在生物体内,细胞必须在三维组织中相互作用和组合,每个细胞的位置与其固有性质一样重要,决定着组织的功能或疾病的功能障碍。因此,即使在研究简单生物体或单......
临床常说的“流式”是流式细胞术(flowcytometry)的简称,因其检测在液体中移动的细胞或粒子而得名。具体来说,单个细胞悬液中加入一个或多个荧光标记的抗体,抗体通过抗原抗体反应与细胞上的抗原结合......
SLASDiscovery上发表的一期特刊介绍了近期关于高通量流式细胞术(high-throughputflowcytometry,HTFC)在药物开发中的最新应用现状。这期特刊由阿斯利康的MeiDi......
......
......
曹云新刘智广张晓楠(第四军医大学中心实验室,西安710032)流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是一种对单细胞自动定量分析的新技术,具有敏感性高、速度快、信息量大和统计学精度高等优点[1......
......
......
体细胞合成和分泌的可溶性蛋白质在机体生命活动过程中发挥重要作用,实时、准确的定性、定量检测,对评价机体的生理病理状态具有重要意义。常规ELISA方法存在标本用量大,检测结果重复性差等缺点,近年利用类似......
《现代仪器》2008年02期 应用流式细胞术对啤酒酵母在含油酸培养基中生长的定量研究 张波;陈君;卢启威;岳慧琴;张丰德......