淋巴细胞转化实验

1.  采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心10分钟。弃上清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1×10⁷/毫升细胞悬液。

2.  取细胞悬液0.6毫升（6×10⁶细胞）加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。

3.  按每毫升营养液加30 ug PHA加入PHA。

4.  37℃孵育68~72小时。培养过程中，每天翻动培养瓶1~2次。

5.  培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起，然后移入试管中。

6.  1000 rpm 离心5分钟。

7.  尽量弃去上清液，将沉淀物混匀，取一滴放在载玻片上，推成血膜（头、体、尾分明）干燥，用瑞特氏染液染色）镜检。

8.  计算淋巴细胞的转化率：油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列（目的是减少推片中细胞分布不均的误差）。
 

9.  每张玻片记数200~400个细胞，计算转化率其中头部50~100，体部50~100，尾部100~200细胞。 一般认为转化率的正常值为60~70%
 

淋巴细胞的转化标准