淋巴细胞转化试验方法

发布时间：2020-04-20 23:08 原文链接：淋巴细胞转化试验方法

T细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如PHA、ConA)或特异性抗原刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加、细胞体积增大并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞转化现象。淋巴细胞转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平，因此，可作为测定机体免疫功能的指标之一。

本实验采用形态学方法进行淋巴细胞转化试验。T淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原如植物血凝素刺激后，转化为体积较大的母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁裂，计数转化细胞的百分率可反映机体的细胞免疫功能。

【材料】

1．RPMLl640培养液(用前调至含小牛血清10％、青霉素100u／m1、链霉素μg/m1，用NaHCO3调pH至7.2-7.4)。

2．PHA(用RPMIl 640基础培养液配成1000μg／m1)。

3．吉姆萨染液。

4．离心机、恒温箱、计数器及显微镜等。

【方法】

2. 2500r／min，离心10min后弃上清液，留0.2m1沉淀细胞制片，迅速吹干。

3. 吉姆萨染色10一20min，水洗，干燥。

4. 油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数，计算转化率。

【结果观察】

1．淋巴母细胞的形态学标准是细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无。可以见到以下几种类型细胞。

(1)成熟的小淋巴细胞：与未经培养的小淋巴细胞一样为6-8μm，核染色致密，无核仁，核与胞浆比例大，胞浆染色为轻度嗜碱性。

(2)过渡型淋巴细胞：比小淋巴细胞大，约l0-20μm，核染色致密，但出现核仁，此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点。

(3)淋巴母细胞：细胞体积增大，约20-30μm，形态不整齐，常有小突出，核质染色疏松，有核仁l-2个，胞浆变宽，常出现胞浆空泡。

(4)其它细胞：如中性粒细胞在培养72h后，绝大部分衰变或死亡，呈碎片。

2．淋巴细胞转化率的计算：按上述分类检查推片头、体、尾三部分，计数200个淋巴细胞，计算过度型和淋巴母细胞百分率。在正常情况下，PHA诱导的淋巴细胞转化率为60％一80％，如为50％一60％则偏低，50％以下则为降低。

【注意事项】

1．培养基成分对转化率影响较大，注意其有效期。

2．小牛血清用前需灭活。

3．培养时要保证有足够的气体。

4．PHA剂量过大对细胞有毒性，PHA转化反应剂量一般10m1，培养瓶内液体总量不要超过2m1，太小不足以刺激淋巴细胞转化，试验前应先测定。