发布时间:2019-04-06 20:04 原文链接: 淋巴细胞活化过程中肌醇磷脂周转的分析

实验步骤

基 本 方 案 1 通 过 道 威 克 斯(DOWEX) 离 子 交 换 层 析 分 析 [3H] 肌醇磷酸

材料




备 选 方 案 通 过 HPLC 方 法 分 析 [3H] 肌醇磷酸

附加材料

[3 H ] InsP 样 本(见基本方案,步 骤 6) 和标准品
除 气 的 H PLC 级水
2mol/L 的甲酸铵,以磷酸调至 pH3.7

基 本 方 案 2 通过薄层层析方法分析肌醇磷脂

材 料

1 % (m/V ) 草酸钾/2m m ol/LED TA

溶剂: 60 : 20 : 23 : 18 : 12 (V7 V /V7 V 7 V ) 氯仿/甲醇/丙酮/乙酸/水 ,或 45 :35 : 10 氯仿/甲醇/4mol/L NH4OH

细 胞(如肿瘤细胞系、杂交瘤、克隆、凝集素刺激的细胞)

无 磷 酸 盐 的 培 养 基(如 GIBCO/BRL) 含 有 1 0 % (V /V ) 热 灭 活 的 胎 牛 血 清(FCS) , 用 HBSS 或 TBS (附录 1 ) 透析以去除磷酸盐

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