1. 将滤膜培养皿放入培养板或培养皿中。
2. 加入培养液,将培养皿倾斜,使培养液充满滤膜下方的空间,尽量置换出空气。加培养液至滤膜水平(6 孔板每孔 2.5 ml;24 孔板每孔 1.0 ml )。
3. 将培养板水平放置,在直径为 25 mm 的滤膜上加入 2 ml 含有 2x106 个细胞的培养液,在直径为 6.5 mm 的滤膜上加入 200 ul含有 5x105 个细胞的培养液,小心不要穿破滤膜。
4. 将培养板放在保护盒中,然后置于湿润的 CO2 培养箱中培养。关键是避免震荡保护盒,而且培养物不应在培养箱中移动,以免溢出和引起污染。
5. 在 3~5 d 内可形成单层,组织型分化(如极性转运)可能需要 5~10 d 或更长时建立。
6. 可无限制地维持培养,每 3~5 d 更换培养液或将嵌套转移到新的培养孔或培养皿。 展开 |