激光共焦显微镜的工作原理分析

　激光共焦显微镜基于模块化概念而设计，可集成多种功能，不仅包括纳米技术，还可灵活升级到受激发射损耗系统(STED)。更有超高分辨率激光扫描共聚焦显微镜，激光共焦显微镜采用独有光学技术，满足您对分辨率的高要求。激光共焦显微镜是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品，是当今世界zui先进的细胞生物学分析仪器。激光共焦显微镜是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图象处理，对生物样品进行定性、定量、定时和定位研究。激光共焦显微镜已广泛应用于细胞生物学、生理学、病理学、解剖学、胚胎学、免疫学和神经生物学等领域。

　　激光共焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描，标本上的被照射点，在探测针孔处成像，由探测针孔后的光电倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收，迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔，焦平面以外的点不会在探测针孔处成像，这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面，激光共焦显微镜克服了普通显微镜图像模糊的缺点。

　　激光共焦显微镜利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。激光共焦显微镜照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，激光共焦显微镜就可得到样品不同层面连续的光切图像。