激光扫描共聚焦显微镜操作步骤及注意事项

　（1）开启仪器电源及光源：一般先开启显微镜和激光器，再启动计算机，然后启动操作软件，设置荧光样品的激发光波长，选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管（photomultipliertube，PMT）检测器能得到足够的信号结果。使用汞灯的注意事项同普通荧光显微镜。
　　
　　（2）设置相应的扫描方式：在目视模式下．调整所用物镜放大倍数，在荧光显微镜下找到需要检测的细胞。切换到扫描模式，调整双孔针和激光强度参数，即可得到清晰的共聚焦图像。
　　
　　（3）获取图像：选择合适的图像分辨率，将样品完整扫描后，保存图像结果即可。
　　
　　（4）关闭仪器：仪器测定样品结束后，先关闭激光器部分，计算机仍可继续进行图像和数据处理。若要退出整个激光扫描共聚焦显微镜系统．则应该在激光器关闭后，待其冷却至少10分钟后再关闭计算机及总开关。
　　
　　2．获取三维图像激光扫描共聚焦显微镜具有细胞“CT”功能，因此，它可以在不损伤细胞的情况下，获得一系列光学切片图像。选用“Z-Stack"模式，即可实现此项功能。其基本步骤是：
　　
　　①开启“Z-Stack”选项；
　　
　　②确定光学切片的位置及层数；
　　
　　③启动“Start”，获得三维图像。
　　
　　3．获取时间序列图像共聚焦显微镜的"Time-Series"功能，可以自动在实验者规定的时间内按照设定的时间间隔获取图像。只需设定所需的时间间隔以及所需图像数量，开启“StartT”功能键，即可进行实验。“Time-Series"功能大大减轻了实验者的劳动强度，对于荧光漂白恢复和钙离子成像等实验非常实用。
　　
　　4．注意事项及维护保养
　　
　　（1）仪器周围要远离电磁辐射源；
　　
　　（2）环境无震动，无强烈的空气扰动；
　　
　　（3）室内具有遮光系统，保证荧光样品不会被外源光漂白；
　　
　　（4）环境清洁；
　　
　　（5）控制工作温度在5～25℃。