“熊猫血”不再怕,使用CRISPR基因编辑增强红细胞输血相容性

　　近日，英国布里斯托大学（University of Bristol）的科研人员在 EMBO Molecular Medicine 杂志发表题为：Enhancement of red blood cell transfusion compatibility using CRISPR-mediated erythroblast gene editing的论文，通过CRISPR基因编辑红细胞，增强其输血相容性。为长期输血的患者的同种免疫以及“熊猫血”输血时难以匹配血型的难题带来了新的解决方法。

　　定期输血是红细胞疾病(如地中海贫血或镰状细胞病)的治疗基础，由于反复输血，同种免疫常常由于在小血型抗原水平上的不相容性而发生。

　　个体存在的非病例但罕见的天然血型表型，虽然这些“熊猫血”很罕见，但在整个人类群体并不算少，他们需要输血时，往往难以匹配到血液。

　　在该研究中，作者使用CRISPR介导的基因组编辑永生化人类成体红细胞系（BEL-A）以产生有核红细胞系，其可以分化成成熟红细胞。

　　在BEL-A细胞系中表达5个sgRNA，敲除5个红细胞中与血型相关的基因，这5个基因编码了最常见的输血不相容性抗原。这5个sgRNA序列信息是之前研究中已被验证过的。

敲除这5个基因后，暴露在图中的任何抗体中，均不发生血液凝集

敲除的5个基因，及其sgRNA序列

　　注1：永生化人类成体红细胞系，由该团队从成体干细胞培育而来，可以无限增殖，在分化成成熟红细胞前可以大规模生产以满足临床需求。该成果于2017年3月发表在 Nature Communications 杂志。

　　注2：成熟的红细胞没有细胞核，是由有核红细胞分化而来。

　　特别值得指出的是，该团队成员使用了CRISPR/Cas9技术实现了5个基因的同时敲除。

　　使用的载体是：lentiCRISPRv2，该载体由张锋实验室2014年发布。图谱如下：

lentiCRISPRv2载体