牛肉膏蛋白胨培养基制备实验

实验方法原理

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、 磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCI提供无机盐。在配制固体培养基时还要加人一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏：3.0 g

蛋白胨：10.0 g

NaCI：5.0 g

水：1 000 ml

pH：7.4-7.6

试剂、试剂盒 牛肉膏蛋白胨NaCI水琼脂氢氧化钠盐酸

仪器、耗材 试管三角瓶烧杯量筒玻璃棒培养基分装器天平牛角匙高压蒸气灭菌锅pH试纸棉花牛皮纸记号笔麻绳纱布?

实验步骤

一、称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人烧杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒人烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。
 

二、溶化
 

在上述烧杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解（图1）将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分，在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%-2.0%的量将琼脂直接分别加人各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。


 

在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。
 

三、调 pH
 

在未调pH前，先用楂密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加 人1 mol/L NaOH边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用lmol/L HCl进行调节。
 

对于有些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法可参考有关说明书）。
 

pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分来灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。
 

四、过滤
 

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察，一般无特殊要求的情况下，这一步可以省去（本实验勿需过滤）。

五、分装
 

1.  按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。分装装置见图2。
 

图2 培养基分装装置

A.  漏斗分装装置；B. 自动分装器 

1.  铁架；2.  漏斗；3.  乳胶管；4.  弹簧夹；5.  玻管；6.  流速调节；7.  装量调节；8.  开关

2.  液体分装

分装高度以试管髙度的1/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。

3.   固体分装

分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
 

4.  半固体分装

试管一般以试管髙度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
 

分装过程中，注意不要使培养甚沾在管（瓶）上，以免沾污棉塞而引起污染。

六、加塞
 

培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等)，以阻止外界微生物进人培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。
 

七、包扎
 

加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞， 其外再用一道麻绳扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制曰期（有条件的实验室，可用市售的铝箔代替牛皮纸，省去用绳扎，而且效果好。）

八、灭菌
 

将上述培养基以0.103 MPa，121℃，20 min高压蒸气灭菌。

九、搁置斜面
 

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜（图3）。
 

图3 摆斜面

十、无菌检查
 

将灭菌培养基放人37 ℃的温室中培养24-48 h，以检査灭菌是否彻底。