牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

摘　要　肠激酶( enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶. 根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pP ICZαA,得到重组质粒pP ICZαA /EKL ,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌. 分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL ( recombinant enterokinase light chain, rEKL ) 纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作. 结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致.