玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的使用方法（一）

IAC-SEP®玉米赤霉烯酮免疫亲和柱

（产品编号：IAC105）

使用对象

IAC-SEP®玉米赤霉烯酮免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、坚果、花生、酱油、醋、辣椒、胡椒、药材和酒类等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中的玉米赤霉烯酮起到十分重要的作用。

IAC-SEP®玉米赤霉烯酮免疫亲和柱适用于以下标准：

GB/T 23504-2009 食品中玉米赤霉烯酮的测定-免疫亲和层析净化高效液相色谱法

GB/T 5009.209-2008 谷物中玉米赤霉烯酮的测定

SN/T 1172-2006 进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定免疫亲和柱-液相色谱法

SN/T 1175-2006 进出口大豆油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的测定

原理

样品经甲醇+水提取液提取、过滤、稀释，然后通过键合有玉米赤霉烯酮特殊抗体的免疫亲和柱。此时，玉米赤霉烯酮被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将玉米赤霉烯酮从亲和柱上洗脱下来。最后，用HPLC或荧光计进行定量检测。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，绝对不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

实验溶液制备

提取液，乙腈/水（8+2）：取80mL乙腈加20mL水，混合均匀。

        乙腈/水（9+1）：取90mL甲醇加10mL水，混合均匀。

HPLC流动相，乙腈/水/甲醇（46+46+8）：取460mL乙腈和80mL甲醇于1L容量瓶中，用纯水定容至1L，用0.22微米的尼龙筛过滤。

标准溶液的配制：取玉米赤霉烯酮标准储备液，流动相为稀释液，配制标准品溶液。例如：取100uL标准品储备液10ug/mL于10mL容量瓶中，用流动相定容至10mL，那么，玉米赤霉烯酮标准品浓度为100ng/mL              

 注：配制好的标准品溶液有效期为7天。

pH 7.0 PBS溶液：称取8.0g氯化钠，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL纯水溶解，然后用浓盐酸调节pH值至7.0，最后用纯水稀释至1000mL。

液相色谱条件

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）

流动相：乙腈/水/甲醇（46+46+8）

流速：0.8mL/min

检测器：荧光检测器，激发波长274nm,发射波长440nm; 紫外检测器，265nm

进样体积：20~100uL