分析步骤
玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的柱容量(最大吸附玉米赤霉烯酮)为1500ng,当样品中玉米赤霉烯酮超过测定范围时,请适当减小上柱体积,使其在检测范围内,计算出准确含量。
1) 样品提取及稀释:
谷物、粮食、花生及其制品、大豆、植物油、调料等样品:(测定范围0-1875 μg/kg) 称取40g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL乙腈/水(9+1)溶液。以均质器高速匀质提取2min,或摇床震荡60min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
饲料样品:(测定范围0-1875 μg/kg)称取40g磨细的样品,5g 氯化钠;置于250mL具塞锥形瓶中,或匀质杯中。加入100mL乙腈/水(8+2)溶液。以均质器高速匀质提取2min,或摇床震荡60min。取下盖子,将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL pH 7.0 PBS溶液稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
酒类:(测定范围0-3750 μg/kg)称取20g样品(含二氧化碳类酒称取前置于4℃冰箱冷藏30min,然后过滤或超声制样),置于50mL容量瓶中,加入乙腈定容至50mL,摇匀。移取10 mL上步的溶液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
酱油,醋,酱及酱制品:(测定范围0-3000 μg/kg)称取25g样品,置于100mL容量瓶中,加入乙腈定容至100mL,超声提取2min。将提取物到入槽纹滤纸上,滤液收集于干净的容器中。移取10 mL上步的滤液,置于干净的容器中。用40 mL纯水稀释,混匀。将上步稀释液通过玻璃微纤维过滤器,滤液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL准备上柱净化。
2) 样品的净化
将上步10 mL滤液,以1滴/秒的流速全部通过玉米赤霉烯酮免疫亲合柱,直至空气进入到亲合柱中。用10 mL纯水以1-2滴/秒的流速淋洗亲合柱2次。用1.5 mL HPLC级的甲醇以1 滴/秒的流速淋洗亲合柱,将所有样品淋洗液(1.5 mL)收集于玻璃测试管中。将1.5mL淋洗液用1.5mL纯水稀释,混匀,注入HPLC检测;或将1.5mL淋洗液在50℃氮气下吹干,用1mL流动相定容后,混匀,注入HPLC检测。
高效液相色谱仪检测玉米赤霉烯酮的标准谱图
注意事项
1) 样品添加回收试验时,标准品添加到样品中,静置2小时后或过夜,再进行样品前处理,否则会出现回收率偏低的现象。
2) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤,如需更改要和本公司技术部联系,确认更改是否合理。
3) 操作步骤中,样品过柱,淋洗,洗脱时,一定要控制好流速,不能太快,否则会使检测结果偏低。
4) 如果将标准品直接过柱验证回收率时,一定要确保标准上柱液中乙腈浓度不要超过20%,否则会影响柱子的吸附能力。
5) 试验中使用的玻璃仪器等,一定要清洗干净,尤其是用次氯酸等处理过的仪器,否则会使检测结果偏低。
6) 当用氮气浓缩洗脱液时,氮气流不要太大,否则会损失部分玉米赤霉烯酮。
需要准备的设备及试剂
C/N编号 | 物品 |
21022 | Clover六位泵流操作架(配有1台空气泵,6个10mL针筒) |
20202 | 高速匀质器,转速可达18,000 r/min ~22,000 r/min |
31955 | 美国vicam微纤维滤纸(1.5um,100张/盒) |
31240 | 折叠式槽纹滤纸(100张/盒) |
36010 | 一次性塑料烧杯(25/包) |
34000 | 一次性测试管(250支/包) |
36020 | 塑料漏斗(10 个/包) |
玉米赤霉烯酮标准品 | |
35016 | 色谱纯级的甲醇(4升/瓶) |
色谱级乙腈(4升/瓶) | |
C546150-U | Cloversil C18 反相色谱柱4.6*150mm(5um) |
C546250-U | Cloversil C18 反相色谱柱4.6*250mm(5um) |
玉米、饲料等基质含有不同水平玉米赤霉烯酮的质控样品 |
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