生命科学拉曼测试样品制备篇—冰冻切片

　　拉曼光谱是一种无损、无标记、非接触式的的分析检测方法，可以为生命科学/医学研究领域的样品提供丰富的分子层面的信息。生命科学/医学研究样品有许多不同的处理和保存方法，本系列教程将介绍如何对生命科学/医学研究样品进行处理及不同处理方法如何进行拉曼测试准备。

　　冰冻切片

　　取材

　　取新鲜组织进行固定或直接剪切至所需大小。

　　固定步骤：

　　4%多聚甲醛（4% PFA）4 ℃固定24 h后（根据组织大小和致密程度调整固定时间）。

　　去离子水或PBS缓冲溶液清洗三次，每次10-30 min。

　　将组织从固定液中取出，在通风橱中用手术刀将目标部位组织平整后剪切至所需大小。

　　包埋

　　在-20℃的低温恒冷箱切片机内制备OCT冻托。

　　在OCT接近凝固时，将组织快速置入半凝的OCT中。

　　冷冻时，用长镊子夹住底托，组织朝上，迅速浸入冷冻剂中，速冻20~30ｓ，取出或者移至-80 ℃冰箱保存。

　　切片

　　切片时将速冻组织室温放置1 min左右，待组织升温至-20 ℃进行切片；

　　切片时，根据组织类型对低温恒冷箱切片机进行温度设定：

　　脊髓、脑组织、肝组织、淋巴结等组织-10～-15 ℃；

　　甲状腺、脾、肾、肌肉等组织-15～-20 ℃；

　　带脂肪的组织-25 ℃左右，含大量的脂肪-30 ℃。

　　贴片

　　将切片用PBS缓冲溶液洗涤3-5次，5 min/次，以除去OCT，防止产生光谱干扰。

　　载玻片置于室温环境，将切片平展地放置在载玻片上。

　　拉曼测试

　　冰冻切片时室温环境中即可进行拉曼光谱及成像测量。