生物显微镜激光扫描共聚焦显微镜概述

生物显微镜--激光扫描共聚焦显微镜概述

激光扫描共聚焦显微镜（laser sconningconfocal microscope,LSCM）在生物医学领域的主要应用是通过一种或多种荧光探针标记后可对固定的组织或活体标本进行观察研究。当这些标本用普通荧光光学显微镜观察时，来自焦点以外的其他区域的荧光对结构的分辨率干扰较大，尤其是标本的厚度在2Pm以上时，其影响更为明显（图l—1）。共聚焦方法可排除“焦点以外”荧光的干扰使侧向和轴向分辨率提高。LSCM的分辨率比普通宽视野光学显微镜的分辨率高（zui大理论分辨率为o．2μm），透射电子显微镜的分辨率可达到0．1nm。因此，略CM在这两种zui常用的形态学技术间架起了桥梁。

生物显微镜--激光扫描共聚焦显微镜概述

    LSCM的成像方法与普通宽视野光学显微镜不同，在普通宽视野光学显微镜中，整个标本全部都被水银弧光灯或佩灯的光线照明．图像可用肉眼直接观察。而共聚焦通过1柬或多束聚焦的光线对标本进行扫描．使共聚焦显微镜获得照明，光源通常为激光，以这种方式扫指标本所得的图缘称为光学切片（面）。这种因像的采集方法是通过仪器进行的一种无损伤性的方法，它使用光线而不是使用机械方式完成对标本的切片。共聚焦方法适用于活细胞标本的图像采集，并以z扫描的方式自动完成三维（3D）数据的采集．改善多标记标本的图像质量。

LSCM在生物医学领域的应用越来越广泛，成为许多研究人员的仪器。但对于许多*次接触15cM的初学者．可能会遇到许多问题，因此本书着重讲述15cM在具体应用时应注意的事项、使用技巧、适用范围等。在生物学成份领域中有各种型号的共聚焦显微镜，结构原理基本相同，本书所描述的各种操作步骤、样品制备的方法基本部可在其他仪器使用。同时可通过其他技术获得更好的光学切片，包括去眷积（deconvolution））技术和多光子成像技术。