用玻璃纸琼脂平板透析培养法观察放线菌形态

（一）实验目的：用放线菌的玻璃纸培养物观察放线菌的个体形态

（二）实验原理：

放线菌自然生长的个体形态的观察现多用玻璃纸琼脂透析培养法。

玻璃纸具有半透膜特性，其透光性与载玻片基本相同，采用玻璃纸琼脂平板透析培养，能使放线菌生长在玻璃纸上，然后将长菌的玻璃纸剪取小片，贴放在载玻片上，用显微镜镜检可见到放线菌自然生长的个体形态。

采用插片培养法也能观察放线菌的个体形态。

（三）实验器材：

1、活材料：培养5-7天的紫色直丝链霉菌（Streptomyces violaceorectus）的斜面菌种、吸水链霉菌5102（Streptomyces hygroscopicus var.Yingchengensis(5102)）斜面菌种。

2、培养基：高氏一号琼脂培养基（见附录一、10）

器材：无菌平皿、玻璃纸、 9ml无菌水若干支、酒精灯、火柴、接种环、镊子、玻璃刮铲、1ml无菌吸管、剪刀、载玻片、显微镜。

（四）实验方法：

（1）将玻璃纸剪成培养皿大小，用旧报纸隔层叠好后灭菌。

（2）将放线菌斜面菌种制成10^—3的孢子悬液。

（3）将高氏一号琼脂培养基熔化后在火焰旁倒入无菌培养皿内，每皿倒15ml左右，待培养基凝固后，在无菌操作下用镊子将无菌玻璃纸履盖在琼脂平板上即制成玻璃纸琼脂平板培养基。

（4）分别用1ml无菌吸管取0.2ml吸水链霉菌（5102）孢子悬液，紫色直丝链霉菌孢子悬液分别滴加在两个玻璃纸琼脂平板培养基上，并用无菌玻璃刮铲涂抹均匀。

（5）将接种的玻璃纸琼脂平板置28—30℃下培养。

（6）在培养至3天，5天，7天时，从温室中取出平皿。在无菌环境下。打开培养皿，用无菌镊子将玻璃纸与培养基分离，用无菌剪刀取小片置于载玻片上用显微镜观察。

（五）实验作业

（1）绘出吸水链霉菌（5102）和紫色直丝链霉菌自然生长的个体形态图。

（2）为什么在培养基上放了玻璃纸后，放线菌仍能生长？

附：插片培养法：

放线菌的插片培养是将放线菌菌种制成孢子悬液后（浓度以10^—2—10^—3为好），取0.2ml放在适合放线菌生长的平板培养基上，用玻璃刮铲涂布均匀，然后将灭过菌的盖玻片斜插入固体培养基中，置28—32℃下培养，3—5天后取出盖玻片放在载玻片上镜检，可见放线菌的自然生长的个体形态。