试剂:
0.2 mol/L Tris-HCl,pH 8.4
0.1 mol/L α-酮戊二酸(二钠盐,Mr=190.1;190 mg 溶于 10 ml 水中)
1 mol/L 乳酸盐(钠盐,Mr=112.1;1.1 g 溶于 10 ml水中)
0.01 mol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;47.1 mg 溶于 10 ml水中)
1.0 mol/L 乙酸铵(Mr=77.1;771 mg 溶于10 ml 水中)
谷氨酸脱氢酶(来自于牛肝脏,40 U/mg,配制溶液:40 U/0.1 ml 0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0)
D-乳酸脱氢酶(来自于猪心脏,约 550 U/mg,10 mg/ml, 配制溶液:55 U/0.1 ml 0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0)
9 mol/L NaOH(36 g 溶于 100 ml水中)
0.01 mol/L NADH(71 mg 溶于 10 ml水中)
磷酸钠缓冲液 8.97 g NaH2PO4(单水,Mr=138) 2.61 g K2HPO4(Mr=174.2) 溶于100 ml水中
溶液Ⅰ(循环混合物)
溶液Ⅱ 加入新鲜配置的 1 ml 磷酸钠缓冲液中; 20 ul 10 mmol/L NADH 储藏溶液 LDH 1.5 ug(稀释储藏溶液 100 倍,取 15 ul) 展开 |