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由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验——​NAD(H)的测定

实验方法原理谷氨酸脱氢酶生成的 NAD+ 在 LDH 催化下转化为 NADH,在第二步反应中形成的丙酮酸的测定可以通过 LDH 反应中添加 NADH。过量的 NADH 通过碱处理破坏。实验材料NAD(H)试剂、试剂盒Tris-HClα-酮戊二酸ADP乙酸铵谷氨酸脱氢酶D-乳酸脱氢酶NaOHNADH磷酸钠缓冲液仪器、耗材荧光光度计实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」0.1 ml 循环混合物被测定的 x ul NAD 或 NADPH 溶液[x 为 1~20; 浓度为(3~50)×10-9 mol/L]。(20~x)ul 0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.037℃ 培养 30 min 将样品转移到 100℃、2 min 来终止反应,接着将样品转移至冰浴每个样品中加入 0.1 ml 溶液 II,25℃ 孵育 15 min,接着将样品转移至冰浴,加入 25 ul 5 mol/L HCl0.1 ml 的样......阅读全文

由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验——​NAD(H)的测定

实验方法原理 谷氨酸脱氢酶生成的 NAD+ 在 LDH 催化下转化为 NADH,在第二步反应中形成的丙酮酸的测定可以通过 LDH 反应中添加 NADH。 过量的 NADH 通过碱处理破坏。 实验材料 NAD(H) 试剂、试剂盒 Tris-HClα-

由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验——NADP(H) 的测定

烟酰胺核苷酸可以作为脱氢酶的底物被测定(特别是 LDH,ADH 作用于 NAD+ 和 G6PDH 作用于 NADP+),根据各自的吸收系数可以利用酶循环的方法在低浓度下被测定。实验方法原理为了测定 NADP(H),可以采用谷氨酸脱氢酶(GluDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH) 的偶联反应:

由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验

NADP(H) 的测定 NAD(H)的测定             实验方法原理 为了测定 NADP(H),可以采用谷氨酸脱氢

由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验

实验方法原理 为了测定 NADP(H),可以采用谷氨酸脱氢酶(GluDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH) 的偶联反应: 在指定的条件下,一个 NADP 分子可以催化生成 5000~10 000 个 6-磷酸葡萄糖酸盐。NADP的浓度为 10-9 mol/L(1 ul 含有 10

由 NAD+还原反应测定的 PDHC 总活性实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 PDHC

由 NAD+还原反应测定的 PDHC 总活性实验

实验材料 PDHC 试剂、试剂盒 磷酸钾NAD+二磷酸硫胺MgCl2丙酮酸二硫代苏糖醇辅酶 A 仪器、耗材 分光光度计 实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品 37℃ 时

由 NAD+还原反应测定 OGDHC 总活性的实验

实验材料 OGDHC 试剂、试剂盒 磷酸钾NAD+焦磷酸硫胺素MgCl2α-酮戊二酸二硫赤藓糖醇辅酶 A 仪器、耗材 分光光度计 实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品

由 NAD+还原反应测定 OGDHC 总活性的实验

实验方法原理 实验材料 OGDHC 试剂、试剂盒 磷酸钾NAD+焦磷酸硫胺素MgCl2α-酮戊二酸二硫赤藓糖醇辅酶 A 仪器、耗材 分光光度计 实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品 37 ℃ 时,于

由 NAD+还原反应测定的 PDHC 总活性实验

实验方法原理 实验材料 PDHC 试剂、试剂盒 磷酸钾NAD+二磷酸硫胺MgCl2丙酮酸二硫代苏糖醇辅酶 A 仪器、耗材 分光光度计 实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」 0.98 ml 实验混合物 0.02 ml 酶样品

由 NAD+还原反应测定 OGDHC 总活性的实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 OGDHC