照高效液相色谱法(通则0512)测定。
避光操作。
供试品溶液取本品适量(约相当于左甲状腺素38g),精密称定,置预先充有氮气的带螺帽试管中,尽量减少在空气中暴露的时间,精密加入蛋白水解酶溶液[称取氯化钠6.435g、三羟甲基氨基甲烷4.846g和他巴唑5.708g,置l000ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,必要时用6mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.4士0.05,作为还原性缓冲溶液。
临用前,取链霉蛋白酶(P5147)适量,加还原性缓冲溶液溶解并稀释制成每1ml中含链霉蛋白酶1mg的溶液]5ml。缓缓通入氮气流5分钟,盖上螺帽,摇匀,置带盖的水浴中,于37℃±1℃水解28小时,期间不时检査混合物分散情况,必要时摇匀。
精密加入1%磷酸乙腈溶液2ml,振荡,以每分钟2000转离心5分钟。取上清液滤过,取续滤液对照品溶液取左甲状腺素对照品38mg和碘塞罗宁对照品9mg,精密称定,置100m1量瓶中,加水-乙腈-浓氨溶液(500:500:1)混合溶液50ml,涡旋使溶解,用50%乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置250mI量瓶中,用还原性缓冲溶液稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置带螺帽试管中,精密加人1%磷酸乙腈溶液2ml,振荡色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以水-乙腈-磷酸(650:350:5)为流动相;检测波长为230nm;进样体积20l系统适用性要求理论板数按左甲状腺素峰计算不低于3000,左甲状腺素峰、碘塞罗宁峰与相邻峰的分离度均应符合要求测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算。