甲胎蛋白（AFP）定量测定（酶联免疫法）标准操作规程

 1. 原理

本试剂盒采用针对不同抗原决定簇的双单克隆抗体分别制备成包被板和酶结合物，和用ELISA双抗体夹心法原理检测人血清中AFP含量。适用于原发性肝细胞癌及胎儿神经管发育异常（脊柱裂、脑积水）的早期辅助诊断。

2. 标本采集：

2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹

2.2 标本种类：血清或血浆

2.3 标本要求：

病人标本无需特殊制备处理

3. 标本储存于运输

3.1 标本的储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。

3.2 标本运输：室温运输

3.3 标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。

4. 试剂：

4.1 试剂名称：甲胎蛋白（AFP）诊断试剂盒

4.2 试剂生产厂家：购买专用成套试剂盒。必须使用经国家食品药品监督管理局批准的试剂。4.3 包装规格：100Test/kit

5.试剂盒组成

5.1 标准品（10、20、50、100、200、400）ng/ml,各1瓶×1ml。

5.2 洗涤液：1瓶×8ml(使用前用500ml蒸馏水稀释)

5.3 包被条 5.4 酶结合勿 5.5 底物 5.6 显色剂 5.7 终止液 5.8 说明书（1份）

试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。

6.仪器设备

7.操作步骤

7.1 加样：将包被孔编号，留1孔作空白对照，其余孔用微量加样器依次加入50ul标准品及待测样品，随即加入酶结合物50ul。轻轻振荡混匀后，置37℃温育30分钟。

7.2 洗涤：手工：将各孔液体甩掉，用稀释后的洗涤液注满各孔，静置20秒，甩掉，重复5次后在吸水纸上拍干。

7.3 显色：每孔加底物50ul,在加显色剂50ul,充分混匀，室温（18-25℃）避光反应5分钟。

7.4 每孔加终止液50ul终止反应。