疏水作用色谱概述

 疏水作用色谱始于1972年SHaltiel及其工作者，他们利用带有碳氢化合物配基的琼脂糖凝胶以“疏水亲和色谱”分离蛋白 质。在其他实验室内也进行了类似研究和探索，1976年Hofstee将这种类型的色谱命名为疏水作用色谱。1980 年前后，不少学者就疏水作用的机理、分离规律等进行了大量研究，但这些工作多是用软或半硬基质进行的，其基本形式是将短烷基链键合于亲水性基球上，作为配 基的烷基链的密度通常不大，且操作压力和流速均不能提高。为改善HIC的分离效率和分离速度，出现了以硬质高聚物微球、硅胶以及CPG为基质的高效HIC 固定相。

    与其他类型相比，对用于这种填料的硅胶基质并没有特殊的要求，只要孔径在25-100nm之间且有较大的比表面积就可以应用，与对CPG的要求相似。只要经过表面修饰或涂层，使其具有合适的亲水表面和较弱的疏水基，就可以制备出高效疏水作用色谱。
    尽管曾研究过不同类型的高效疏水作用固定相，但有实用价值的主要是两类。一类是在基质表面键合上短链烷烃或苯基而成，例如，TOSOH公司的Pheny- TSK -Gel 3000SW、Butyl-TSK 3000 SW柱均是很典型的商品HPHIC柱。另一类是醚型键合相。在硅胶上先键合上环氧丙氧基三乙氧基硅烷，再在路易士酸催化下接上短链烷氧基而成

如果将聚乙二醇与环氧化硅胶反应，则可制备出聚乙二醇型HIC 填料。作者的实验室曾以可控孔径玻璃为基质，键合以聚乙二醇，制备出HIC填料。这种填料，系无定型颗粒，粒径分25-37及5-10μm 两种。孔径有30、60 以及100nm等几种。使用了分子量为400、600、800、1000及2000的PEG为配基，研究了不同色谱条件下蛋白质的分离行为。结果表明随 PEG链长的增加，蛋白质的保留加大，比较适宜的是PEG600-1000。对一般生化分离而言，孔径30-60nm较为合适。以结晶胰蛋白酶为样品， 经.:( 分离后的活性回收率为近100%，表明这种.:( 填
料很适合于蛋白质的分离。耿信笃等以硅胶为基质，以改性聚乙二醇为配基，制备了用 于蛋白质分离的HIC 填料。在分离基因重组γ- 干扰素时发现，干扰素的活性回收率有异乎寻常的升高。经研究后认为，这是由于HIC分离过程有利于变性蛋白的复性所致。这更加说明，HIC是生物大分子分 离和纯化的一个重要的手段。