将成片细胞的生长液倒掉,用Hank's 液洗一次。
加入适量的0.1~0.25% 胰蛋白酶,37 ℃孵育1 分钟。
将细胞倒放,细胞在上,胰酶在下,继续孵育37 ℃5~10 分钟。
将胰蛋白酶倒掉,再加入原量的生长液,用10 毫升吸管吹打分散细胞。
用生长液按原量3-4 倍稀释,即一瓶细胞能传3-4 瓶。
病毒接种及CPE 观察:
①取已长成单层细胞的培养瓶二只,用无菌毛细滴管吸去管中液体。
②用无菌的1 毫升吸管吸稀释的腺病毒液0.1 毫升加入一只单层细胞培养瓶中,另一只加0.1 毫升营养液不接种病毒作对照,细胞瓶平放,使其接触整个细胞层,置37 ℃使作用15~30 分钟。
③取出单层细胞瓶,每只瓶中加入营养液0.9 毫升,盖紧后置37 ℃孵箱中培养1~2 天。
④取出细胞在低倍显微镜下观察,注意有无出现CPE(细胞肿胀,变圆,集聚成葡萄串状等)。 展开 |