病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织，特别是肿瘤组织，经多次传代可建立传代细胞系，这种细胞能无限地传代，某些传代细胞对病毒敏感范围较广，可用作病毒的分离鉴定，如HeLa 细胞，Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞，HeLa 细胞来自子宫颈癌，Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上颚癌。由于这几种传代细胞有致肿瘤作用，目前仅用做病毒的分离鉴定及一些病毒学研究，不能用于疫苗的生产。实验步骤将成片细胞的生长液倒掉，用Hank's 液洗一次。加入适量的0.1～0.25% 胰蛋白酶，37 ℃孵育1 分钟。将细胞倒放，细胞在上，胰酶在下，继续孵育37 ℃5～10 分钟。将胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生长液，用10 毫升吸管吹打分散细胞。用生长液按原量3-4 倍稀释，即一瓶细胞能传3-4 瓶。病毒接种及CPE 观察：①取已长成单层细胞的培养瓶二只，用无菌毛细滴管吸去管中液体。②用无菌的1 毫升吸管吸稀释的腺病毒液0.......阅读全文
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织，特别是肿瘤组织，经多次传代可建立传代细胞系，这种细胞能无限地传代，某些传代细胞对病毒敏感范围较广，可用作病毒的分离鉴定，如HeLa 细胞，Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞，HeLa 细胞来自子宫颈癌，Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
传代细胞培养实验
实验方法原理 当初代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，进而扩展汇合，占满一切空间，此时需要进行分离培养。这一操作称传代或再培养。如拖延传代，细胞会因增殖过度，培养基营养枯竭和代谢产物积累而发生中毒。80%汇合或刚汇合细胞是理想传代阶段。实验材料 细胞试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶EDTA培养液
传代细胞培养实验
实验方法原理当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒，如果不及时的减少细胞密度，细胞将逐渐衰老死亡。因此需要将培养物按照比例重新接种到新的培养器皿（瓶）内进行
传代细胞培养实验
实验方法原理 当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面培养基内的营养物不足和代谢物积累不利于细胞生长甚至发生中毒，如果不及时的减少细胞密度，细胞将逐渐衰老死亡
细胞培养传代培养的实验方法
一、原理细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。为了保持细胞正常的二倍体核型，传代培养一般
细胞传代实验——细胞培养技术
细胞传代实验可用于：（1）医学研究；（2）提供细胞种。（3）进行细胞生物学研究。实验方法原理培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代；部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。实验材料细胞试剂、
细胞培养传代培养的方法
1．悬浮生长细胞传代多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代法，即悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2-1/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代.2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可
细胞培养传代培养的实验步骤
实验步骤1．入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。3．超净台台面应整洁，用0.1%新洁尔灭溶液擦净。4．打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去
细胞培养传代培养的实验原理
传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。
原代细胞培养和传代培养的方法
原代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用 EDTA 或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至 37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸
传代细胞培养与观察
实验概要了解传代细胞的传代方法及操作过程，学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。实验原理传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或1：2以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。这种培养，第一步也是制备细胞悬液，当细胞长成致密单层时，它很容易被蛋白水解酶和EDTA)所破坏。所以—般采用胰蛋白酶和EDTA(
细胞培养传代培养的培养步骤
1、附着型胞(adherentcell)（1）吸掉旧培养液。（2）用D-PBS洗涤细胞一至二次。（3）加入trypsin-EDTA溶液(1ml/25cm2,2ml/75cm2)，37℃作用数分钟，于倒立显微镜下观察，当细胞将要分离而呈现圆粒状时，吸掉trypsin-EDTA溶液。(若不移去tryps
病毒的培养方法实验——鸡胚培养法
病毒必须在易感的活细胞内才能增殖，因此，根据不同病毒选择敏感动物，离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。实验方法原理鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不
细胞培养传代培养的定义
传代培养是指需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。传代培养中的细胞传代培养（subculture），当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速
常规细胞培养方法（原代培养和传代培养）
原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血
其它源细胞培养传代及冻存方法
其它源细胞培养传代及冻存： ▷细胞的复苏培养:从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,同时不断摇动使之迅速融化，然后用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接
细胞培养传代培养的实验步骤和注意事项
实验步骤1．入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。2．倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。3．超净台台面应整洁，用0.1%新洁尔灭溶液擦净。4．打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去
病毒的培养方法实验——动物接种法
实验方法原理注意选择动物种类，年龄。按病毒侵袭部位的不同，选择适宜的接种途径，例如脑炎病毒以注射脑内最敏感。接种后经一定潜伏期，动物发病或死亡即进行解剖。根据动物的症状表现，器官病理改变，受染脏器组织悬液能在同种动物进行连续传代，并排除其他微生物污染的可能性等，即可证明有病毒的增殖。实验材料小白鼠实
关于细胞培养的细胞传代介绍
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加
特殊细胞培养实验_悬浮培养法
实验方法原理悬浮培养是使贴附性细胞呈悬浮状态生长。如所培养的细胞本身属悬浮生长类型，则无须做任何处理，在传代时先做离心处理去除旧培养液，添加新培养液即可。但在培养贴附型细胞时，因其有贴附性，必须进行干扰使细胞不能贴附，才能形成悬浮状态生长的细胞。实验材料细胞仪器、耗材培养瓶搅拌器实验步骤1. 用大
细胞培养传代培养所需材料
1、无菌磷酸生理缓冲液(Dulbecco’sphosphate-bufferedsaline,Ca++/Mg++free,D-PBS, GibcoBRL21600-010)2、trypsin-EDTAsolution(0.05%trypsin-0.53mMEDTA-4Na,GibcoBRL25300
细胞培养传代培养的材料和器材
材料和器材材料：培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，培养细胞。药品：培养基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清或胎牛血清，0.25%胰蛋白酶，Hank's液。仪器：CO₂培养箱，倒置显微镜，超净台。
特殊细胞培养实验_微载体细胞培养法
实验方法原理微载体细胞培养开始于60年代末期，最早使用离子交换凝胶作为载体，轻微搅动即可悬液在培养基中，因而可增加细胞附着的面积，达到大量培养细胞的目的。后来，根据细胞附着生长的特点，对微载体进行了改良，使其带有电荷或其它介质，更利于细胞附着和生长。这一方法亦可用于常规量的培养，也可用于大规模的培养
初代细胞培养实验——消化培养法
初代培养或原代培养，可以用于：（1）从供体获取组织后的首次培养；（2）组织和细胞刚刚离体，生物性状尚未发生很大的变化，具有二倍体遗传性状，在供体来源充分、生物条件稳定的情况下（年龄、性别），在一定程度上能反映体内状态。实验方法原理合成培养基胰蛋白酶消化培养法，能把组织块分散成细胞团或单个细胞，便于细
脂肪干细胞培养和扩增实验_脂肪干细胞的传代培养
分离获得ASC后，可以通过连续传代使其生长和扩增。原代培养后，传代2〜3次，ASCs呈现单层，大而扁的细胞形态，其直径在25〜30μm。待细胞达到汇合时，它们形态上呈纺锤体形，类似于成纤维细胞。来源：《人干细胞培养》实验材料脂肪干细胞试剂、试剂盒ASC培养基PBSA胰蛋白酶仪器、耗材组织培养瓶 25
病毒的培养方法实验—组织培养法原代细胞单层培养
实验方法原理组织培养是目前培养病毒应用最广的一种培养方法，其优点是①经济适用，结果正确且敏感；②较实验动物易于控制。原代细胞单层培养法，是指动物（包括脊椎动物和无脊椎动物）的组织自机体取出后，经胰酶或其他细胞分散剂消化处理，得到单个细胞悬液。以一定量接种到特定容器中，加入细胞生长所必需的营养液，置合
细胞传代、培养的方法
实验原理：将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时 也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养
单细胞培养培养方法介绍平板培养法
将制备好的单细胞悬浮液，按照一定的细胞密度，接种于适当厚度的薄层固体培养基上进行培养的方法，称为平板培养。等量的单细胞培养液与等量熔化(30～50℃)的琼脂培养基(0．6%～1%)混合，迅速铺板于培养皿中，琼脂冷却凝固后，细胞分布均匀地被固定在薄层(厚度大约1mm)培养基中。培养皿用石蜡膜封闭，在2
单细胞培养培养方法介绍看护培养法
有些植物细胞，一旦分离出来，不仅不能分裂、增殖，还可能死亡。看护培养法是用一块愈伤组织来哺育单细胞，使其正常分裂和增殖的培养方法。用微量移液管或小勺，将来自悬浮培养物或愈伤组织的单细胞转移到漂浮的定量滤纸上，滤纸下是旺盛生长的愈伤组织。几天之后，在愈伤组织看护影响下，在一般培养基中沉寂的细胞开始分裂
病毒的培养方法实验
实验方法原理 鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。实验步骤 1. 鸡胚的检查将9～11 日龄鸡胚置于检卵器上，照视观察