病毒DNA的提取实验——拭子标本中病毒DNA的提取

拭子标本

TE 缓冲液裂解液蛋白酶K

离心机棉签

预操作：将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中，洗下标本。若标本在 4 h 内处理，可置于室温保存，否则需 4℃保存。

1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min, 沉淀细胞。

2. 吸去上清液，若有血液残留，可1 ml TE 缓冲液悬浮细胞，移至Ep管中，重复离心1次。

3. 去上清液，如仍有血液残留，可重复第 2 步，直至沉淀物中无红细胞痕迹为止。

4. 用 50~300µ1 裂解液悬浮细胞，使细胞达到 10~1000 个/µl 。

5. 用 55℃,1 h 消化裂解细胞，释放 DNA, 然后 95℃ ,10 min 灭活蛋白酶 K 。

6. 10000 r/min 离心 5 min, 取上清液做 DNA 模板。

1. TE 缓冲液由 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 和 1 mmol/L EDTA 组成。

2. 裂解液由 50 mmol/L KCl、10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)、2.5 mmol/L MgCl₂、100 µg/ml 蛋白酶 K 、1% Laureth-12 和 0.5%Tween-20 组成。