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病毒DNA的提取实验——拭子标本中病毒DNA的提取

实验材料拭子标本试剂、试剂盒TE 缓冲液裂解液蛋白酶K仪器、耗材离心机棉签实验步骤预操作:将采有口腔、鼻腔或生殖道等处分泌物标本的棉签置于 2 ml 生理盐水中,洗下标本。若标本在 4 h 内处理,可置于室温保存,否则需 4℃保存。1. 将生理盐水中的标本以 2 000 r/min 离心 5 min, 沉淀细胞。2. 吸去上清液,若有血液残留,可1 ml TE 缓冲液悬浮细胞,移至Ep管中,重复离心1次。3. 去上清液,如仍有血液残留,可重复第 2 步,直至沉淀物中无红细胞痕迹为止。4. 用 50~300µ1 裂解液悬浮细胞,使细胞达到 10~1000 个/µl 。5. 用 55℃,1 h 消化裂解细胞,释放 DNA, 然后 95℃ ,10 min 灭活蛋白酶 K 。6. 10000 r/min 离心 5 min, 取上清液做 DNA 模板。展开 注意事项其他1. TE 缓冲液由 10 mmol/L Tris-HCl(......阅读全文

MAGNA 96核酸提取操作流程

  简介  目的:本文用于实时逆转录-聚合酶链反应(real-time RTPCR, rRT-PCR)试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合,用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。  方案

美国CDC:rRT-PCR检测2019新型冠状病毒操作说明

简介  目的:本文用于实时逆转录-聚合酶链反应(real-time RTPCR, rRT-PCR)试剂盒体外定性检测呼吸道和血清标本中2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。针对2019新型冠状病毒设计引物和探针组合,用于SARS样冠状病毒的通用检测和2019新型冠状病毒的特异检测。  方案应用

【最新】2019新冠病毒核酸检测试剂注册技术审评要点发布

   分析测试百科网讯 国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心发布了《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》的通告(2020年第4号)。  以下是公告全文:关于发布《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》的通告(2020年第4号)  为应对新型冠状病毒感染的肺炎疫情,按照“统

GP全自动核酸提取仪在2019-nCoV冠状病毒核酸制备中的意义

最近“2019-nCoV”冠状病毒肆虐全球,这种突发传染病严重威胁人民的健康和生命安全,目前这种冠状病毒的核酸检测是最高效快速的确诊方法之一,而核酸的制备是精准检测该病毒的重要前提。核酸的自动制备不仅确保了提取核酸质量的一致性和稳定性,还能保护检测人员不受病毒感染威胁。GP 核酸提取仪以自身的优

什么是PCR阴性?

举乙肝的例子来说:通过酶免的方法查乙肝两对半和通过荧光定量PCR的方法学查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身体不舒服或者正常体检(比如入职体检),他去看医生,临床医生怀疑他得了肝炎(肝炎有很多种比如病毒性肝炎,也就是病毒倾入他体内后由于人体的三道防线没能把病毒消灭掉,导致病毒在

MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用进展

  1、前言  从目前的情况来看,大多数的微生物实验室采用的是一些传统的细菌鉴定手段,如革兰氏染色、氧化酶等生化反应,或者是采用梅里埃公司的API和Vitek鉴定系统。这些检测手段都很浪费时间,通常需要六到八个小时,对于一些难培养的细菌鉴定来说,将会耗费更多的时间。有时候我们也会采用一些分子生物学上

5分钟快速释疑新冠病毒检测法:核酸还是CT好?

试剂盒检测结果不仅与试剂盒质量有关,还与新冠病毒自身的特点、采样部位、采样量、运输和储存环节,以及实验室检测条件和人员操作有关2020年2月3日,武汉大学中南医院影像科副主任张笑春发了一条朋友圈:“别迷信核酸检测了,强烈推荐 CT 影像作为目前 2019-nCoV 肺炎主要依据”,并称这是“一个一线

长知识了!新冠病毒2019-nCoV实验室检测内容全都在这里

  当下我国正处于新型冠状病毒2019-nCoV疫情发展阶段,该病毒感染主要会造成的新型的急性肺炎症状(WHO已将其名为NCOVID19),疫情已在全国范围内肆虐超过20天,对我国民生健康和经济造成极大影响。目前网上涌现多篇关于新型冠状病毒2019-nCoV实验室检测技术的文章,文章质量水平千差万别

3分钟了解新冠病毒检查哪些项目

  当下我国正处于新型冠状病毒2019-nCoV疫情发展阶段,该病毒感染主要会造成的新型的急性肺炎症状(WHO已将其名为NCOVID19),疫情已在全国范围内肆虐超过20天,对我国民生健康和经济造成极大影响。目前网上涌现多篇关于新型冠状病毒2019-nCoV实验室检测技术的文章,文章质量水平千差万别

新冠病毒检查哪些项目?这篇文章告诉你

  一、血液学检查  病毒感染相关的血液学检查主要包括血常规、血生化以及其他针对性的检测项目,相关指标为临床常用的病毒感染诊断指标,为疾病的辅助诊断提供依据。  1、血常规  血常规中的许多项具体指标都是一些常用的敏感指标,对机体内许多病理改变都有敏感反映,其中又以白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白和

新冠核酸检测检查哪些项目

  自2019 年 12 月以来,湖北省武汉市陆续发现新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)感染患者,且呈快速上升之势。自新型冠状病毒疫情爆发以来,近期湖北、武汉疫情从过去的爆发式增长已经走向趋缓,武汉防控工作取得阶段性成效。  而事实上,在2020年1月

一文汇总新型冠状病毒肺炎病毒核酸检测专家共识

  突发新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)肺炎疫情以来,感染病例快速上升。随着疫情的发展和防控力度加大,全国各地乃至境外均有病例报道[1,2,3,4],及时对急重症及疑似患者进行诊断需要快速有效的方法,病毒核酸检测可为诊断提供直接证据[5,6]。核酸检测

新型冠状病毒病原学检测假阴性的产生原因及高效检测...

新型冠状病毒病原学检测假阴性的产生原因及高效检测方法分析自2020年开始,新型冠状病毒肺炎的疫情就一直牵动着亿万人的心。截至2月11日8:29,全国已确诊病例累计42708例,疑似21675例,疫情防控形势依然严峻。 新型冠状病毒传播方式多样,除了经呼吸道飞沫和接触传播的主要途径外,目前已

淋病的实验室诊断和药敏

淋球菌实验室检查包括涂片,培养检查淋球菌、抗原检测,药敏试验及PPNG测定,基因诊断。       (一)涂片检查:        取患者尿道分泌物或宫颈分泌物,作革兰氏染色,在

中国、美国及WHO新冠病毒核酸检测试剂审评要求简要对比

  自2019年12月新冠肺炎疫情发生到如今全球呈多区域爆发情况下,各国监管机构和IVD企业陆续采取积极措施。为积极应对新冠肺炎疫情,国家药监局于第一时间启动应急审批程序。1月20日,器审中心起草《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》,并于2月12日在中心官网率先对外发布。  世界卫生

PCR技术 PCR技术的应用

一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合

3分钟了解:PCR检测怎么做以及注意事项

PCR反应的准备PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物(终浓度)各100~250μmol/L引物(终浓度)各5~20μmol/L模板DNA0.1~2μgTaq DNA聚合酶5~10 UMg2+(终浓度)1~3mmol/L补加双蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq

PCR反应体系与反应条件 高速冷冻离心机

PCR反应体系与反应条件    标准的PCR反应体系:   10×扩增缓冲液      10ul   4种dNTP混合物    各200umol/L   引物           各10~1

PCR反应体系与反应条件2 冷冻离心机

PCR反应体系与反应条件  标准的PCR反应体系:   10×扩增缓冲液      10ul   4种dNTP混合物    各200umol/L   引物           各10~100pmol    模板

pcr技术的小结

PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引

PCR污染与对策

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因  (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污

PCR检测方法

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染

PCR实验污染与对策

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪

PCR技术应用十:HIV感染

  八十年代以来由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染而引起的艾滋病(AIDS)因其严重的危害性而受到人们高度重视,力争早期诊断和寻求有效治疗是防止其广泛传播的关键所在.聚合酶链反应(PCR)具有敏感、特异和快速的特点,是检测病毒、评价病情进展和探讨发病机理的有效工具.一、HIV的基因结构  HIV的基因

定 量 PCR 技 术 简 介

聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是微量核酸扩增的有效工具,由于其灵敏、特异、快速等优点,在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技术的发展,特别是病毒或肿瘤的治疗监测、疾病的诊断、机体基因表达调控方面,不仅需要检测其存在是否

王成彬:对新型冠状病毒核酸检测阳性率低的一点看法

  作者:中华医学会检验医学分会主任委员  王成彬  近期有媒体及专家反映新型冠状病毒核酸检测阳性率低、有的病例重复检测多次阴性后出现阳性结果、咽拭子标本多次检测阴性但最后在呼吸道灌洗液标本中检测出阳性结果、CT影像筛查出现新型冠状病毒肺炎特征但核酸检测阴性等问题。经过与临床分子诊断学专家

什么是PCR?

 定义  聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction),  聚合酶链式反应具体内容点击: 聚合酶链式反应,简称PCR。聚合酶链式反应,其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异

新冠抗原抗体检测

  疫情动态  根据世卫组织最新实时统计数据,截止小编撰稿,目前全球确诊新冠肺炎2248654例。世卫组织发言人玛格丽特·哈里斯14日表示,疫情尚未到达顶峰,就单个国家而言,目前美国的新冠疫情是全球最严重的,美国新冠肺炎确诊病例已超过73万,意大利确诊病例累计175925例,西班牙确诊病例达1944

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

粪便检验及进展

  粪便是由未消化的食物、经消化后未吸收的食物残渣与消化系统分泌物、消化道粘膜脱落物以及微生物、寄生虫等组成的混合物。进行粪检验可以获得被检者消化系统功能、病理变化以及微生物和寄生虫感染等广泛的信息,具体来说,进行粪检验,一可以了解消化道及通向消化道的肝、胆胰等器官是否有梗阻、炎症和出血等