瘦肉型猪(PIC344)精液碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究

摘　要:用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE2Sepharose FF 和Sephacryl S2200 柱层系,从瘦肉型猪( PIC344) 精液中提取出碱性磷酸酶。纯化倍数11146 ,比活为81123U/ mg 蛋白。提取液经PAGE 和SDS2PAGE 检测,呈现一条带。该酶相对分子质量为90112 KD ,亚基分子质量为48141 KD ,该酶为两个相同亚基组成。等电点为8119 ,最适pH 值915 ,最适温度为40 ℃,以磷酸苯二钠为底物测得Km 值为3198 ×10 - 4mol/ L 。经分析,Cu2 + 、Cd2 + 为酶的抑制剂,Ni2 + 、Ca2 + 、Mg2 + 为该酶的激活剂。选用CuSO4 、Cd(NO3) 2 作酶的抑制类型判断,结果表明,CuSO4 为非竞争性抑制,抑制常数为1132 ×10 - 3mol/ L ,Cd(NO3) 2 为竞争性抑制,抑制常数为3133 ×10 - 4mol/L 。