癌基因转化细胞：基因组DNA转染法

实验概要

 癌基因转化细胞

实验步骤

1．提取基因DNA（含癌基因）。

2．DNA准备：取供体DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸钠使最终浓度至0.3M混匀。

3．再加2倍体积无水乙醇，3000转/分离心10分钟，去上清。

4．加入转染缓冲液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl₂，令最终浓度为125mM，用吸管轻轻吹打三次。置室温下10～30分钟，待液体透明度降低，出现微浊蓝色时，即可用于转染受体细胞。

5．细胞：取生长状态良好、处于半汇合阶段的指数增生期细胞，在转染前24小时，更换培养液1次。

6．转染：向每瓶中加DNA－磷酸钙沉淀物0.5～1ml/瓶，置37℃作用4～6小时。

7．培养：弃去培养液，用15％甘油处理3分钟，无血清培养漂洗1次，加入新培养液，37℃温箱培养24小时。

8．传代：按1：5或1：10分瓶传代，每2～3天换液1次，接近汇合时血清用量降至5％，培养2～3周。

9．检测：逐日观察，待出现转化灶后，分离入另瓶中培养。