磷酸酶a的测定实验

酶断裂多糖的α-1，4-糖苷键：

（葡萄糖）n＋P_i →（葡萄糖）n-1＋葡萄糖-1-P

实验中反应与葡萄糖磷酸变位酶偶联：

葡萄糖-1-P → 葡萄糖-6-P

并且 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化：

葡萄糖-6-P＋NADP^＋ → 葡萄糖酸-6-P＋NADPH＋H^＋

磷酸酶 a

磷酸钾 EDTA 糖原 葡萄糖磷酸变位酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 酶样品

25 ℃ 时，于 340 nm 处吸收值降低，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.05 mol/L 磷酸钾，pH 6.8

0.01 mol/L EDTA（Mr＝292.3，29.2 mg 溶于 10 ml 水中）

糖原（60 mg 溶于 10 ml 水中）

1 mmol/L 1，6-二磷酸葡萄糖（脂鲤环己基铵盐，Mr＝736.8；7.4 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L NADP（Mr＝787.4；79 mg 溶于 10 ml 水中）

1 mol/L MgCl₂（Mr＝203.3，六水合物，2 g 溶于 10 ml 水中）

葡萄糖磷酸变位酶 100 U/mg（100 U/ml 溶液）

6-磷酸葡萄糖脱氢酶，200～400 U/mg（300 U/ml 溶液）。两种酶在使用之前，都要用游离的铵盐制备。如果外加了硫酸铵悬浮液，在用前必须用 0.05 mol/L 磷酸钾 pH 6.8 透析。