离心机沉降系数测定实例

　　⑴样品：牛血清白蛋白

　　⑵样品溶液与离心：按0.6%浓度将牛血清白蛋白溶于0.14M NaCl、0.01M磷酸缓冲液中，pH7.0。用12mm厚双槽分析池，一边加入溶液一边加入溶剂，约各0.3ml。分析池与平衡池平衡重量，使平衡池比分析池轻0.5g以内，然后分别装入分析转头。分析转头装于分析离心为什么，关转动腔，抽真空。开 Schlieren光光源，选择工作速度一60000转/分，离心室温。转动腔达到真空后离以机开始运转加速，此时在观察窗口可以看到离心图型。达到工作速度后即为恒速离心。待看到样品峰的尖端后即可以6分 钟间隔照相，共照6张。照完相即可关机，取出样品液，清理转头和分析池。照相用强反差显影冲洗后即得Schlieren光路沉降图形照片。

　　⑶沉降图象测量：Schlieren沉降图可以用比长仪，读数显微镜，或投影仪测量。要求测量的横向量程为6cm，测量精度应优于10μm。通常读数显微镜已能满足要求。投影仪可以使图象放大于屏幕上，读测比较容易，眼睛不易疲劳。测量时把沉降图象的底片放于测量仪器上，使液面的垂直线与测量仪中的垂直线重合，然后用十字标线依次测量内参孔，液面，界面峰尖，和外参考孔的位置，每个图象至少读测三次，取平均值。依次把每个图象依同样方法测量，把数据列成表5。

　　照相号 x1(mm) x2(mm) x3(mm) x4(mm) (x3-x1)/a log[5.65+(x3-x1)/a]

　　1 45.426 37.626 33.807 13.810 0.6125 0.7967

　　2 45.640 37.830 33.351 13.420 0.6485 0.7992

　　3 45.890 38.070 32.895 13.663 0.6854 0.8017

　　4 45.733 37.921 32.163 13.523 0.7161 0.8039

　　5 45.802 38.000 31.580 13.593 0.7507 0.8062

　　6 46.009 38.211 31.172 13.800 0.7830 0.8084

　　(4)沉降系数S的计算：沉降图测量完，先检查每一张图和第六张图的x2-x1值，二张图的x2-x1值的差应该小于界面峰位置的测量误差。实测x2-x1的差值为0.002，说明液面在离心30分钟内变动为 0.002mm。界面峰在30分钟内移动距离是第六号图的x1-x3减第一号图的x1-x3，是3.208mm,其峰位测量意味着允许为0.03。可内陆液面变动0.002mm远小于峰位测量误差0.03mm，说明离心时没有发生漏液。

　　按a=(x4-x1)/1.7求算光路对分析池的放大倍数，然后按(x3-x1)/a求算界面峰离开内参考孔的实际距离，再按x=5.65+(x3-x1)/a求算界面峰离开旋转中心的实际距离，再由对数表求算logx植，计算数据亦列于表5中。