红细胞残留的PBMC精确计数和活性分析（二）

3、通过AO/PI检测PBMC细胞活力

为了验证AO/PI双染法精确计数总PBMC，从全血中分离了5个新鲜的白细胞样品，3%的醋酸溶解，然后台盼蓝染色人工计数对比AO/PI双染法

样品A：加AO/PI，然后直接通过Cellometer双荧光细胞计数仪进行自动计数

样品B：3%的醋酸裂解红细胞，然后台盼蓝染色，计数。

两种方法对比，结果显示，AO/PI双染法能够不用裂解RBC进行总PBMC计数和活力分析。

4、AO/PI双染色法排除RBC污染导致的计数误差

使用血球计数板手工计数和AO/PI双染自动计数两种方法，进行15个PBMC样品的计数。其中手工计数的操作者为经验丰富的计数方面专家，可以凭丰富的经验及不断微调显微镜焦距区 分出红细胞和PBMC。

如图所示，手工计数法为蓝色柱条，AO/PI双染自动计数法为绿色柱条。AO/PI双染法没有受到高度RBC污染的影响，可以精确计数PBMC。而手工计数需要靠经验丰富的操作者一个一个的判断红细胞和PBMC。此结果显示AO/PI双染自动计数和经验丰富的操作者进行的手工计数计数PBMC的结果一致。

同时，15个样本中分离的结果差异很大，不同人尤其不同病人分离后红细胞RBC污染的差异大。

三、结语

RBC污染极大的影响PBMC样品的浓度和活性的精确性，RBC污染的程度在不同病人之间有差异，标准的PBMC处理protocol无法区分，只有AOPI双荧光自动细胞计数仪能够快速、高效、精确进行PBMC计数和活力分析，有助于免疫学的研究。