纯化测序反应产物实验

甲酰胺 核酸 寡核苷酸

ABI PRISM 3100Genetic Analyzer 微量离心管 DTR Gel Filtration Cartridges (Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪

一、材料

1.缓冲液和溶液

样品上样液

所用的样品上样液取决于所用的设备。对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,推荐使用高度脱离子

的甲酰胺（如ABI的Hi-Di-甲酰胺）。

2.核酸和寡核苷酸

在方案3中二、方法、步骤5得到的测序反应产物

3.特殊设备

ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer，微量离心管，DTR Gel Filtration Cartridges(Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪

二、方法

1.从包装袋中取出所需数目的组装好的圆筒，仔细检査，确保圆筒中板模没有干，如果管中已经没有多余的液体或是板模已干，加入200ul去离子水，使板模重新水合几分钟。

2.将圆筒放于微董离心管中，1360g离心2min(如在采用固定倾角转子的Eppendorf5415C中4000r/min)。这一步是必需的，否則圆简中会加入多余水分.

3.取出圆筒，放置到另一个干净的管中，小心将样品加入到板模的中间。

4.将圆筒放回到离心机，保持与第一次离心相同的方向，1360g离心1~1.5min。

较短的离心时间则回收率较低，一般为75%~85%,但几乎可以完全去除没有结合的染料.较长的离心时间虽然可提高回收率（95%),但是洗脱物中会混有终止染料，导致引物附近的碱基含混不清。

5.洗脱物可在-20°C冻存，也可以用自动测序仪立即分析。

6.在其空浓缩仪中浓缩洗脱物20~30min,不要加热，由于染料是光敏感的，浓缩时间不宜过长，否则可能导致降解。

7.按照测序仪的说明书，用10ul的上样缓冲液重悬样品，上样董取决于所使用的测序仪，对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer而言，每个毛细管加1~l.5ul即可。

8.按照测序仪说明书进行电泳分离和样品分析。