(一)显示线粒体—Regand染色法
1.取材固定:固定材料必须新鲜,所以要求杀死动物后立即取材,切成1—2mm3大小的块,投入固定液中。
固定液:
3%重铬酸钾20ml
福尔马林(中性)5ml
固定4天(可在冰箱中),每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天,每2天换一次液体。
2.流水冲洗24小时后,脱水、透明、包埋、切片等过程均按常规。
3.染色
(1)切片脱蜡到水(按常规);
(2)媒染:用5%铁明矾溶液,在35℃内放24小时后用蒸馏水洗;
(3)染色:苏木精液染24小时;
(4)分色:用5%铁明矾进行分色,此步要在显微镜下进行,边分色,边检查,直至适合为止;
(5)水洗;
(6)脱水——封片(按常规);
(7)镜检:线粒体被染成蓝黑色。
(二)显示高尔基体—DaFano氏硝酸钴镀银法
1.溶液的配制
(1)硝酸钴溶液:
硝酸钴1g
中性福尔马林15ml
蒸馏水35ml
(或用乙醇或甲醇30ml,中性福尔马林15—20ml,水80ml配制)
(2)硝酸银溶液:
硝酸银1.5g
蒸馏水 100m
(3)还原剂:
对苯二酚1—2g
中性福尔马林15ml
亚硫酸钠0.1—0.5g
蒸馏水100ml
2.镀银步骤
(1)固定:在硝酸钴溶液中固定10—24小时,但不宜超过24小时;
(2)蒸馏水快洗;
(3)室温下在硝酸银溶液中放置36—48小时;
(4)蒸馏水冲洗;
(5)还原剂中还原,8—24小时;
(6)蒸馏水洗,快步脱水,透明,包埋;
(7)切片—帖片—脱蜡到水—封片;
(8)镜检,高尔基体呈黑色,细胞质呈黄色。
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