组织切片的免疫荧光标记实验

实验材料 组织样品

试剂、试剂盒 PBS抗体

仪器、耗材 玻片加湿盒

实验步骤

1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。

2.  待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。

3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片上加40~50 μl 抗体，应能盖住切片）。

4.  用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1 h。

5.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。

6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每载玻片可加40~50 μl 抗体）。

7.  将第二抗体加于切片上，置加湿盒中室温温育1 h，以PBS洗玻片3次（5 min/次）。

8.  将盖玻片放于纸巾上，滴加1滴Gelvatol 于盖玻片中央。翻过载玻片放于盖玻片上（勿施压），将玻片置工作台上，用铝箔覆盖避光放置30 min，使Gelvatol 凝结。

9.  显微镜下观察结果，或置玻片盒中贮于4℃。