组织切片的免疫金标记

实验方法原理 利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外，胶体金还可与其它多种生物大分子，如SPA、PHA、ConA等结合。

实验材料 组织样品

试剂、试剂盒 免疫金标记物

仪器、耗材 培养箱显微镜

实验步骤

1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒，由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片，放入玻片盒中（每边放6片），或故湿盒中（载玻片勿相互接触）。

2.  待载玻片达室湿且未干时，铺加PBS于切片上（勿溢出玻片）。

3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每一载玻片上加40~50 μl 抗体，应能盖住切片）。

4.  用与泵相连的巴斯德吸管，在切片的一端吸去玻片上的PBS，并从另一端加上抗体，盖上加湿盒，室温温育1 h。

5.  以PBS冼玻片3次（5 min/次），从切片一端加入新的PBS缓冲液，由另一端吸去旧的缓冲液。

6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min（每载玻片可加40~50 μl 抗体）。

7.  加免疫金标记第二抗体温育2 h。

8.  显微镜下观察结果或放密闭玻片盒中，室温贮放。

9.  显微镜下观察结果，或置玻片盒中贮于4℃。