组织培养物的继代培养

材料和设备

材料 从培养4-6周的外植体上长出的愈伤组织、丛生芽或胚状体

超净工作台

培养基　N ₆ +0.5 mg/L 2,4-D  N ₆ +2 mg/L 6-BA（也可以自已设计）

三角瓶、带有吸水纸的成套的培养皿、镊子、解剖刀

70%酒精、95%酒精及70%的酒精棉球

酒精灯、火柴、记号笔、酒精喷壶

二、方法步骤

1 取材  在无菌室的超净工作台内，每次取一瓶培养物，灼烧 培养瓶 口约20 毫米处，用灼烧冷却后的镊子和解剖刀，取出外植体或者愈伤组织放在无菌的培养皿中。每个培养皿中约放4-6个外植体或者愈伤组织。把每块愈伤组织分成两、三个不小于5 mm见方的小块。外植体下面向着中心的细胞常呈坏死状,不适宜作继代培养。这些坏死的部分应当与正常的部分分离并弃去。每次操作后要去掉用过的吸水纸并重新盖上培养皿的盖子。

2 继代转接  将正在发育的外植体或愈伤组织转移到新鲜培养基上，接种方法同前。转接后在 培养瓶 上写明培养物、培养基、日期。长期培养的胡萝卜组织会产生大块愈伤组织。正在发育的愈伤组织作第一次继代培养所用的实验程序与以后每隔四周转移一次建成愈伤组织系的继代培养程序相同。

3 实验记录 将实验记录抄录于笔记本上，注明实验开始的日期、持续期、培养物的数目、污染数目和所作的不同处理。在四星期内，每隔一星期用肉眼观察培养物，记录培养物形态的变化,培养物的生长状态、鲜重变化等，必要时作拍照记录。