细胞传代培育的办法

一、原理

细胞在培育瓶长成细密单层后，已基本上饱满，为使细胞能持续生长，一起也将细胞数量扩展，就必须进行传代（再培育）。

传代培育也是一种将细胞种保存下去的办法。一起也是使用培育细胞进行各种实验的必经进程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才干分瓶。

二、材料和试剂

1、细胞：贴壁细胞株

2、试剂：0.25％胰酶、1640培育基（含10％小牛血清）

3、仪器和器材：倒置显微镜，培育箱、培育瓶、吸管、废液缸等

三、操作过程

1、将长满细胞的培育瓶中本来的培育液弃去。

2、参加0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下调查细胞。跟着时刻的推移，原贴壁的细胞逐步趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，参加10ml培育液停止消化。

调查消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并呈现细针孔空地时停止消化。一般室温消化时刻约为1—3分钟。

4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培育液塞好橡皮塞，置37℃下持续培育。第二天调查贴壁生长情况。

附：消化液制造办法：

称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），参加100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。

胰酶溶液中也可参加EDTA，使终究浓度达0.02％。