细胞凋亡检测操作流程2——BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段

凋亡检测操作流程

二、 BrdU检测凋亡细胞DNA断裂片段

相关试剂及组分：

一步法: APO-DIRECT试剂盒（货号：556381）：

二步法: APO-BRDU™试剂盒（货号：556405）： 

实验操作（适用于APO-DIRECT试剂盒）： 

1. 细胞固定：、1) 用PBS洗细胞后，将细胞重悬于1%多聚甲醛的PBS溶液中，浓度为1-2x106/ml，冰浴30-60分钟。

2) 300xg离心5分钟，弃上清。 

3) 用5ml PBS洗细胞两次，重悬于70%乙醇中，浓度为1-2x106/ml，冰浴30-60分钟。（70%乙醇细胞悬液在-20°C放置12-18小时后进行细胞凋亡检测，得到的效果最好。细胞可以在-20°C保存几个月。）

2. 配制染色液，现用现配。 

3. 细胞染色：

1) 取离心管和Falcon试管，按标本顺序编号。 

2) 取1x106细胞悬液加入离心管中，300xg离心5分钟，弃去乙醇，留下沉积细胞。 

质控细胞（Negative Control Cells、Positive Control Cells）：混匀后取1ml（细胞数约 1x10^6/ml）加入离心管中，300xg离心5分钟，弃去乙醇，留下沉积细胞。 

3) 每管各加入1.0ml Wash Buffer，洗细胞两遍，弃上清。 

4) 加入DNA标记液50μl重悬细胞。 

5) 37°C温育60分钟（或者室温过夜），每15分钟摇匀一次。（非质控细胞37°C温育时间需根据不同 情况有所凋整。） 

6) 每管加入1.0ml Rinse Buffer，300xg离心5分钟，弃上清。重复两遍，弃去上清。 

7) 加入0.5ml PI/RNase A Solution，混匀。若细胞浓度低，可将用量调整到0.3ml。 

8) 室温避光孵育30分钟。 

9) 3小时内上流式细胞仪测定结果。