细胞培养——收到细胞的处理方式

　　细胞活化︰

　　 1. 收到细胞株包裹时， 请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞 株请尽速开始培养， 或立即冷冻保存(置于–70 °C， 隔夜后， 移到liq N2)。

　　2.冷冻细胞解冻程序:

　　2.1. 依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比 例， 制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之 血清种类， 若因实验需要， 必须有所不同时， 务必以缓慢比例渐次改变培养 基组成， 确定细胞适应后， 方进行所需之实验。

　　2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种 类培养之。

　　2.3. 将培养基置于37 °C 水槽中回温， 回温后喷以70 % 酒精并擦拭之， 移入无 菌操作台内。取出冷冻管， 立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 水面高度不可 接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全 部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部， 移入无菌操作台内。

　　2.4. 依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask 中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基， 混 合均匀，放入37 °C，5 % CO2 培养箱培养。

　　2.5. 对绝大多数细胞而言，1 % 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活 化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除， 待第二天确定细胞生长或贴附良 好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需 立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5  -10 ml 培养基中， 离心300 xg (约1000 rpm)，5 分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基， 将细胞均匀混合后， 转移至培养瓶中， 再放入37 °C， 5 % CO2 培养箱培养。

　　收到T25 flask 细胞时， 处理方式为︰

　　1. 于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。请检查 flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题， 不 要打开盖子，请立即通知细胞实验室。

　　2. 将原封之T25 flask 静置于37 °C， 5 % CO2 培养箱中，使细胞回温至37 °C， 并 让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask 内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，依 一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。