细胞培养基础问答

细胞培养实验中用量最多的就是细胞培养基，虽然细胞培养试验基本技术大同小异，但是每种细胞的培养条件却相差甚远。若偏离某种细胞所需的培养条件，则会导致细胞表达不同的表型

因此，在实验前，需要熟悉自己所使用的细胞系，并在实验中严格遵守所有产品的操作说明。 

在实验过程中，作为实验小白，我们应该如何应对相关问题呢？

来，大家看黑板啦~ 

首先，我们要如何挑选适合自己细胞生长的培养基呢？

选择培养基没有确切的标准，有几点建议可供参考：

建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞适合的培养基。可以查阅 ATCC 或在购买细胞株时咨询供应商。

根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640。

其他实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。

也可用多种培养基培养细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验室结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

如何正确地保存培养基？

普通的培养基放置在 2-8℃ 冰箱避光保存，若已开封建议3周内使用。未开封的培养基，一般可稳定保存1年。

培养基中酚红的作用是什么？导致培养基颜色变化的原因有哪些？

酚红在培养基中被用来作为 pH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

培养基颜色变黄，原因有：培养基中细胞代谢产物为酸性，培养瓶受污染，细菌代谢产酸等导致。

培养基颜色偏暗红色，原因有：培养基保存在 4℃ 冰箱中，培养基内的二氧化碳逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂酚红会随着碱性增加而更偏暗红。

我感觉自己的培养基污染了，这要怎么进行测试呢？

取 0.1ml 液体培养基涂布到无菌蛋白栋牛肉膏培养基上 37℃ 培养 24h，观察有无杂菌生长（肉眼即可观察到）。

如果我的培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦培养基中添加了血清和抗生素，建议避光保存在 4℃ 冰箱且在 2 周内用完。因为一些抗生素和血清的基本成分在解冻后就开始降解了。

哇！我的培养基怎么有沉淀了，这是怎么回事？怎么预防处理沉淀？

先判断培养基是否已经污染，其次，若沉淀为絮状沉淀则可能是加入血清引起的，此沉淀对细胞培养无影响。若沉淀为结晶，有可能是因为向培养基里加入的辅助试剂降低了培养基的溶解度，使一些无机盐析出。

可应用离心、过滤的方法去除这些沉淀，尽可能地减少血清冻融次数。

那我什么情况下可以使用不加酚红的培养基呢？

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素（特别是雌激素）的作用。为避免固醇类反应，培养细胞时，用不加酚红的培养基；一些研究人员在做流式细胞检测时，为了避免酚红干扰检测，也使用不加酚红的培养基。