每个细胞都不一样,一般是细胞长到80%的时候可以铺板
你可以先做个生长曲线,确定最佳的铺板密度和生长时间,比如PC12就加药6小时就行,而Sao-2需要48小时,一般你可以试试培养12小时
你是一次性把细胞接种到6孔板或12孔板中吧
做药物时间实验, 一般采取"倒叙法". 假设要检测0到72小时药物处理的细胞, 每24小时为一个点. 操作:
1. 以一定密度种细胞各个时间的和重复的细胞一起种上,带细胞贴壁后。
2.加药用培养基(溶解药的培养基)
第一天(72小时点): 加药用培养培养基与处理72小时, 设3个以上平行孔.(六孔板的话可以同时做三个)
第二天(48小时点): 同上操作
第三天(24 小时点): 同上操作
第四天(0 小时点): 同上操作。其实这个就到了处理时间了。
应该注意问题:
1.细胞密度问题,三天之内基本长到板底90---98%,所以你的知道细胞增长速度。
2.加药后,药用培养基的最终浓度。
3.种细胞的时候培养液最好是终体积的一半,这样就可以加一半2倍浓度的药用培养液了。个人建议终体积2----2.5ml.
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