细胞培养注意事项（二）

（一）如何避免细胞污染

细胞污染的种类可分成细菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。

（二）支原体 （mycoplasma）污染的细胞， 对细胞培养有何影响

不能以肉眼观察出支原体污染异状。除极有经验的专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨。

支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数，代谢及研究任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为 mycoplasma-free，实验结果的数据方有意义。

（三）培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，颜色会偏暗红色，且 pH 值会越来越偏碱性

培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO₂ 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 （通常为 phenol red）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤 CO_{2 ，}以调整 pH 值。或酸碱调PH。

（四）L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

（五）什么培养基中可以省去加酚红？培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。