细胞培养过程中常见的问题说明

通过多次与客户的了解和反馈，赛百慷的售后服务人员发现，客户在收到经过专业包装的细胞后，由于没有经过系统专业的检查和处理，就直接进行实验，以致于后期容易产生了一系列问题。鉴于客户对这一方面的知识有所欠缺薄弱，赛百慷的技术人员经过总结，对于在收到细胞怎样专业处理做了以下说明：

一、问：细胞收到之后怎么处理？

答：常温运输的细胞

首先观察包装是否完好，瓶口是否漏液，然后显微镜先拍摄4x 、10x、 40x不同倍数下的照片各两张。放入培养箱稳定两小时后开始换液，贴壁细胞把培养基全部吸去，加入6ml新的完全培养基，悬浮细胞离心后，用6ml完全培养基重悬细胞。注意细胞的培养环境。

低温运输的细胞，通常是用干冰寄送。

客户收到细胞后，观察干冰是否挥发，细胞是否溶解。没有问题可以直接放入液氮罐保存（长时间），或者超低温冰箱（不超过一周）。

二、问：细胞冻存后，复苏效果不好？

答：目前还有很多人采取4°、﹣20°各半小时再转入-80°冰箱，这方法不好控制，有的细胞适合，有的细胞就达不到理想效果。现可采用程序降温盒来冻存，降温盒内添加的异丙醇可以达到每分钟降一度的要求，操作也简单。

冻存液采用90%血清+10%DMSO。部分低分化或干细胞可以添加马血清冻存，另外可以先将冻存液配置成80%血清+20%DMSO,重悬细胞时用血清重悬，避免直接用DMSO对细胞吹打造成损伤。

三、问：细胞有黑点怎么回事？

答：这种情况可能性就比较多了，首先判断黑点是在细胞表面，还是胞质内，还是在细胞外。细胞表面黑点增多可能是因为状态变差，可能是培养条件不适合导致，或者细胞活性降低。细胞质内黑点增多，先确认是否是多核细胞。细胞外有黑点，黑点游动则可能是细菌污染，不游动但随着培养时间增长黑点数量增多，应该检测是不是支原体污染，悬浮细胞多数有黑点，可能是碎片，可低速离心去除。腺癌多数是分泌因子，看着黑点增多。

四、培养基，血清怎么选？

答：最好和细胞来源用的什么品牌使用相同的血清。基础培养基进口和国产差别不大。专业的细胞公司使用的血清都是经过了大量细胞培养验证的，不要轻易更换，目前国内血清品牌较多，质量不齐。