肿瘤细胞能量来源:谷氨酰胺
L-谷氨酰胺是一种氨基酸,细胞的重要能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。同时L-谷氨酰胺不稳定,在中性的水溶液中会自发降解; 降解产物对细胞有毒性 (对干细胞,原代细胞影响尤其大)。能影响细胞活性、蛋白表达水平及糖基化模式等。那如何解决呢?
方案有二:
选择不含谷氨酰胺的培养基,自己添加
选择稳定的谷氨酰胺替代物
经过科学家不断努力,终于找到了稳定的谷氨酰胺替代物: glutaGRO。它有何方功能呢?原来,它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽,稳定性高,可在室温下保存,2年稳定 (谷氨酰胺需冷冻保存),使用更方便。同时不易降解,不产生有毒性氨,更利于细胞生长。但仍需注意:该替代物适于哺乳动物细胞培养,但不适合昆虫肿瘤细胞培养体系!!!
能量来源 : 丙酮酸 (Sodium Pyruvate)
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。当葡萄糖不足的时候,细胞可以代谢丙酮酸钠,保证细胞更好地生长。同时某些对葡萄糖利用存在问题的细胞必需添加哦。
平衡盐溶液
平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成;它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养;同时用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
它由这些小伙伴组成:PBS 磷酸盐缓冲液,DPBS(Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines), Earle’s 平衡盐, Hank’s 平衡盐。具体每种试剂的成分,欢迎大家留言咨询,或者访问:http://cellgro.com/。
培养基中的pH缓冲剂
绝大多数细胞的zui佳生长条件是pH 6.8-7.8。
多数培养基利用碳酸氢钠进行缓冲,碳酸氢钠的缓冲需要二氧化碳。其中高碳酸氢钠 (1.5 – 3.7g/L) 需要 5 – 10% CO2,低碳酸氢钠(0.35g/L) 不需要二氧化碳孵箱。当然,也有不依赖于二氧化碳的氢离子缓冲剂如:HEPES,在一定范围内对细胞无毒性作用。能较长时间控制恒定的pH范围,保证细胞的良好生长。大家可以根据肿瘤细胞和实验要求具体选择。
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