发布时间:2020-07-14 09:38 原文链接: 细胞的离心分离基础和分离实例(六)

(三)用沉降速度法分离细胞:

利用重力沉降(1g),或低速速率-区带密度梯度离心(<1000×g)也可以纯化各

种细胞。
下面举一些分离实例来说明这种方法。主要方法取自参考文献5,11,12,
用沉降速度法分离细胞举例

细胞样品

被分离细胞类型

梯度

离心时间

/RCF( × g)

设备

结果



纯度

产率

活力







白血球

淋巴细胞(a) 单核细胞(b)

BSA(1.5~6.5%)

9 分/20× g

特制离心室

a) > 90% b) ~ 90

a)90% b)67%

99%

5

白血球

淋巴细胞(a)

单核细胞(b)

Ficoll(2~4%)

2 小时/1g

重力沉

降室

a) -

b)69 ~

77%

a) -

b) 28%

>98

12

白血球

淋巴细胞(a) 单核细胞(b)

Ficoll ( 3.4 ~ 16.9%)

45 分/800 ×g

低速区带转头

/

/

/

12

预处理白血球

淋巴细胞(a) 嗜碱性细胞(b)

Ficoll(4.5~9.5 %)

15 分/85 ×g

甩平转头100ml 离心管

a) > 95% b)62 ~ 72%

a) > 90% b)30 ~ 50%

/

11

人骨髓细胞

CFU-C

Ficoll(2~4%)

2h/1g

重力沉降室

/

/

/

/

预处理的犬胃

细胞

壁细胞(a)

主细胞(b)

Ficoll(2~4%)

50 分/1g

重力沉

降室

a) >

60%

b) 85%

a) ~

50%

b) ~

30%

/

12

窦状肝细胞

Kupffer(a)

Endothelial(b)

Percoll

(3.5~18%)

8 分/16g

特殊沉降室

a) 98%

b) 97%

a) 68%

b) 86%

>95

5










 

(四)细胞的离心浮选:

利用离心浮选法分离细胞最初是在1948 年由Lindahl 提出的,当时取名为“逆流离心” (文献12)。这个设想在上世纪60 年代中期由Beckman 公司研发成为商用浮选转头和浮选离心系统,经过逐步改进发展成目前的JE-6B(5ml,3,470×g)及JE-5.0(40ML,4,700×g) 和Hitachi 的R5E(40ml,5,000rpm )细胞浮选系统。现代的浮选分离可以用光学系统直接在TV 显示屏上观察离心浮选过程(透明锥形离心室)。

离心浮选法特点:

l   利用细胞悬浮在锥形离心室内受到的离心力,流体阻力和浮力的平衡关系实现不同

种类细胞的纯化,纯度很高。

l   不需要密度梯度;

l   适合分离纯化直径在5~50μm 的细胞;

l   收集细胞的数量可达107 ~1012 个(JE-5.0 或R5E);

l   通过光学系统可以观测浮选过程;

l   可以实现自动收集已纯化的细胞;

l   R5E在离心机门上有照相机,记录浮选过程;

l   离心浮选室可以高温消毒(121℃,20分)

    

离心浮选系统组成:

l   Hitachi或Beckman高速冷冻离心机;

l   离心浮选转头(日立R5E或贝克曼JE-5.0);

l   环氧树脂透明离心室;

l   带流量计、蠕动泵及加样分配阀的加样系统;

l   浮选转头专用观察门盖;

l   可以实现自动收集已纯化的细胞;

l   光源组件(装在转头下方);

l   TV显示系统.

例6 肝主质细胞倍体级分离(文献13)

l  所需设备同上述。

l   干细胞浮选用介质:L-glutamine(131mg/l),L-aspartic acid(13.3mg/l),

L-threonine(23.8mg/l), L-serine(31.5mg/l), glycine(37.6mg/l), L-alanine(53.5mg/l),

L-glutamic acid(132.4mg/l), KCL(223.7mg/l), NaH2PO4·H2O(96.6mg/l),MgCl2·6H2O

(101.7mg/l), NaHCO3(2.01g/l), glucose(3.60g/l), fructose(3.60g/l),

Sucrose(67.4mg/l).溶液调节到PH7.4,渗透压:308mOsm,配置后储存在-20℃待用。

l   肝主质细胞悬液,从三月龄雌性WAG/Rij 鼠取出;

l   trypan 蓝染色剂。

l  结果:各种倍体细胞分布

二倍体(2n)

四倍体(4n)

八倍体(8n)

16 倍体(16n)




单核

双核

单核

双核

单核

双核

/


相关文章

上海市2025年度关键技术研发计划“细胞与基因治疗”拟立项项目公示

根据市科技计划项目管理办法有关规定,现将上海市2025年度关键技术研发计划“细胞与基因治疗”拟立项项目予以公示。公示链接:http://svc.stcsm.sh.gov.cn/public/guide......

细胞与基因治疗|国家重点研发计划颠覆性技术创新重点专项申报指引

5月26日,京津冀国家技术创新中心发布《国家重点研发计划颠覆性技术创新重点专项2025年度细胞与基因治疗领域项目申报指引》。该项目面向基础性、战略性重大场景,聚焦细胞与基因治疗领域关键核心技术环节,形......

3D活细胞样本在轨长期冷冻保存首获突破

4月30日,神舟十九号飞船携空间站第八批空间科学实验样品顺利返回地球。其中,中国科学院深圳先进技术研究院(以下简称深圳先进院)医药所能量代谢与生殖研究中心雷晓华研究员团队的“太空微重力环境下人多能干细......

EVIDENT焕新亮相细胞年会,以奥伟登之名加速本土化战略

人工智能正以前所未有的速度重塑细胞生物学研究。从高分辨率成像到细胞行为动态分析,AI技术不仅提升了数据处理的精度与效率,同时随着AI与生物学、医学等学科的深度融合,其在细胞研究中的应用正不断突破边界,......

最高500万上海2025年度关键技术研发计划“细胞与基因治疗”项目开始申报

上海市科学技术委员会关于发布2025年度关键技术研发计划“细胞与基因治疗”项目申报指南的通知沪科指南〔2025〕5号各有关单位:为深入实施创新驱动发展战略,加快建设具有全球影响力的科技创新中心,根据《......

西湖大学连发两篇Nature破解复杂疾病细胞地图与线粒体转运之谜

描述疾病相关细胞的空间分布对于理解疾病病理学至关重要。近日,西湖大学杨剑团队在Nature在线发表题为“Spatiallyresolvedmappingofcellsassociatedwithhum......

生命科学领域再添国之重器:人类细胞谱系大科学研究设施启动建设

湾区再添"国之重器"3月25日,总投资逾30亿元的人类细胞谱系大科学研究设施在广州国际生物岛正式破土动工。作为国家"十四五"规划布局的重大科技基础设施,该项目将......

一种蛋白能调节细胞年轻与衰老态

日本大阪大学团队发现,接头蛋白复合物2α1亚基(AP2A1)能让细胞在年轻和衰老这两种状态之间切换,这意味着在逆转细胞衰老研究方面迈出了关键一步。相关论文发表于近期《细胞信号》杂志。随着年龄增长,衰老......

新型脑细胞会告诉我们何时停止进食

当小鼠摄入足够食物时,小鼠大脑中的神经元会告诉它们停止进食——人类可能也有同样的细胞,所以我们有朝一日可能会操纵这些细胞来帮助治疗肥胖症。相关研究成果发表于《细胞》。“我们试图解答的主要问题是大脑如何......

科学家破解辐射损伤细胞机制

中国科学院广州生物医药与健康研究院副研究员孙益嵘团队与美国加州大学洛杉矶分校的研究人员合作,首次证实了干扰素基因刺激因子(STING)蛋白可以通过一个全新信号通路(PARP1-PAR-STING)直接......