细胞系的DNASTR谱_利用ABI377DNA测序仪进行凝胶电泳

TEMEDSGM Plus®凝胶上样混合液

ABI377 DNA 测序仪制胶材料凝胶装置材料冰或者电制冷板热循环仪凝胶板和凝胶盒缓冲液梢热传导板

1. 在烧杯中混合以下各成分，制备 4 % 聚丙烯酰胺凝胶（制胶材料：量筒、天平、过滤器（如 Sartolab 150 ml 滤器），真空泵、梳子、0.2 mm 胶隔板、磁力搅拌器、尿素（如 Fisher）、丙烯酰胺贮存液（如Bio-Rad 40 % 丙烯酰胺/BIS 19：1）、无菌纯水（如 Fisher AR 级水）、混合床基树脂（如 Sigma）、过硫酸铵（如 Sigma）、10× TBE （如 National Diagnostics）、TEMED （如 Sigma））：

(a)尿素 18 g；

(b)40 % 丙烯酰胺贮存液 5.2 ml；

(c)水 27 ml；

(d)混合床基树脂 0.5 g 。

2. 灌胶。

3. 参照技术手册，安装 ABI377 DNA 测序仪，准备跑胶。

4. 从热循环仪中取出样品，制备上样混合物（甲醛、葡聚糖蓝色染料（试剂盒提供）、Gene Scan500（GS500 ROX）内尺寸标准（试剂盒提供）），每管如下：

(a)甲醛 1.2 μl；

(b)GS500 ROX 0.13 μl；

(c)葡聚糖蓝色上样缓冲液 0.2 μl。

5. 吸 1.5 μl 上样混合物，加入适当的管或板中。同时制备 2 个等位梯度（试剂盒提供）的上样混合物。向适当的管或板中加入 PCR 扩增产物或等位梯度，轻轻混合。

6. 加热含 PCR 扩增产物的上样混合物，使 DNA 变性，95°C 约 3 min，立即移入冰浴中或设定在 0°C 的电子冰盒中。

7. 参照 ABI 技术手册，完成 DNA 测序仪的安装，装上凝胶，从单数泳道开始上样。

8. 跑胶需 2.5 h 。