细胞表面抗原检测实验

HeLa细胞

1640培养液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液体石蜡

盖片 载片 培养瓶 培养皿 滤纸 镊子 吸管 倒置显微镜 荧光显微镜 微量加样器

1.  将培养瓶中的结肠癌细胞接种到装有盖片的培养皿中，培养2~3天。

2.  在倒置镜下观察到盖片上的细胞生长状态良好后，在盖片左上角用玻璃笔做一下标记，以免在以后的操作中正反面颠倒。

3.  将盖片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分钟。

4.  用PBS洗三次，注意不要将PBS液直接倒在盖片的细胞面，以免引起细胞大量丢失。用滤纸片将盖片上的PBS轻轻吸干，不要损伤细胞层。

5.  将已稀释好的小鼠抗体滴在盖片上．每个盖片50 ul，37℃温育30分钟。

6.  用PBS洗三次，滤纸吸干。

7.  将已稀释好的荧光标记羊抗鼠二次抗体5ul滴加在盖片上，37℃温育30分钟。

8.  用PBS洗三次，滤纸吸干。

9.  将载片上滴一滴液体石蜡。然后将盖片细胞面朝下放到载玻片上，在荧光显微镜下观察。