实验概要
学习细菌的培养方法及培养基的配置。
实验原理
在基因工程实验和分子生物学实验中,细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化;基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。
大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时,其开始裂殖前,先进入一个滞后期。然后进入对数生长期,以20~30min复制一代的速度增殖。最后,当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时,菌体密度就达到一个比较恒定的值,这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基,也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。
主要试剂
1、胰蛋白胨
2、酵母提取物
3、氯化钠
4、1mol/L NaOH
5、琼脂粉
6、抗生素(氨苄青霉素、卡那霉素等)
主要设备
1、培养皿
2、带帽试管
3、涂布器
4、灭菌锅
5、无菌操作台(含酒精灯、接种环、灭菌牙签等)
6、恒温摇床
实验材料
大肠杆菌
实验步骤
(一)LB培养基的配制
配制每升培养基,应在950m1去离子水中加入:
细菌培养用胰蛋白胨 10g
细菌培养用酵母提取物 5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质完全溶解,用1mol/L NaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL,在15 lbf/in2 (1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min,即为LB液体培养基。
LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。
(二)细菌的培养
(1)在液体培养基中培养
1、过夜培养
⑴取5ml液体培养基加入一只无菌的试管中。
⑵用接种环或灭菌牙签挑一个单菌落,接种于培养液中。
⑶盖好试管,在摇床上以60r/min速度,于37℃过夜培养。
2、大体积培养
⑴按1∶100的比例将过夜培养物加入到一无菌烧瓶中,烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。
⑵于37℃,约300r/min剧烈摇动培养。
(2)在固体培养基中培养
细菌在固体培养基上培养主要是为了获得单菌落和短期保存。
平板划线法分离单菌落
⑴采用无菌技术,用接种环将接种物从平板的一侧开始划线。
⑵重新消毒接种环,从第一划线处将样品划线至平板的其余部分,重复划线直至覆盖整个平板。
⑶于37℃培养直至长出单菌落。
中新社香港6月20日电香港理工大学(理大)20日召开记者会公布,理大研究发现两种治疗超级细菌“肺炎克雷伯菌”的新方案,显示出良好疗效和临床应用潜力。由理大微生物学讲座教授、化学生物学及药物研发国家重点......
调查澳大利亚大堡礁的珊瑚微生物组的研究人员发现了两个共存的细菌群落。而且,他们首次发现,其中一个是导致人类衣原体的细菌的近亲。这一发现提供了关于珊瑚礁健康的更多信息,并可能有助于解决珊瑚白化的问题。大......
由于一种使用SHERLOCK(CRISPR的进化版)检测唾液中细菌的新型工具,这在未来可能可以帮助人们在检查后很快带着关于口腔健康的更全面信息离开牙医。这种精确的工具比现有的方法要快得多,并可能导致口......
惰性的、沉睡的细菌--或称孢子--可以在没有营养物质的情况下存活数年,甚至数百年,抵御热量、紫外线辐射、抗生素和其他苛刻的化学物质。孢子如何恢复生命一直是一个长达一个世纪的谜。新的研究确定了感应蛋白是......
研究人员在细菌中发现了一种新的途径,有可能使各种行业脱碳。这一突破可以大大减少燃料、药物和化学品生产过程中产生的温室气体的排放。劳伦斯伯克利国家实验室和加州大学伯克利分校之间的合作研究工作已经催生了能......
根据亚当-罗森塔尔博士的研究结果,细菌群落中基因相同的细胞表现出不同的功能。这意味着该群体的某些成员表现出更多的被动行为,而其他成员则产生使我们感到不舒服的毒素。荧光显微镜图像显示,在一个基因相同的群......
虽然耐抗生素的细菌在不断增加,但你可能认为这些潜在的致命细菌主要是在人和其他动物聚集的地方发现的:即地球表面。但是来自加拿大和法国的研究人员在一个更人注目的地方发现了它们。根据美国疾病控制和预防中心的......
炎症性肠病(IBD)的病因很复杂,其中宿主遗传学、肠道微生物组、屏障功能障碍和免疫过度激活加快了疾病的发展。IBD患者在疾病发作或症状发作前肠道通透性升高,粘膜相关细菌数量增加,微生物群组成改变。这些......
近年来,合成生物学的快速发展为肿瘤细菌疗法的深度优化带来新的契机。基于合成生物学手段,科学家们能够利用基因工程改造的微生物或细胞而非传统的化学小分子或生物制剂,作为新型疾病治疗方法的开发基础。人工设计......
福建师范大学研究员付新苗团队发现了热休克能极大增强氨基糖苷抗生素对多种革兰氏阴性病原细菌(包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌、多重耐药克雷伯菌和鲍曼不动杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌以及临床分离的耐药大肠杆菌等)的......