维生素C含量的测定

实验概要

1.  学习定量测定维生素C的原理和方法。

2.  进一步掌握滴定法的基本操作技术。

3.  了解松针、水果及蔬菜中维生素C的含量情况。

实验原理

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。她分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂）、蔬菜（黄瓜、洋白菜西红柿等）中的含量更为丰富。

维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型（氧化型）。根据它具有的还原性质可测定其含量。还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚(Dichlorophenolindo phenol，简写 DCPIP)，本身则氧化成脱氢型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用2，6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未被全部氧化前，则滴下的染料立即被还原成为无色。一旦溶液中的抗坏血酸已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色转变成微红色时即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被全部氧化，此时即为滴定终点。从滴定时2，6-二氯酚靛酚标准溶液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。

       

该法简便易行，但有下列缺点:
1。在生物组织内和组织提取液中，抗坏血酸能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸形式存在。它们同样具有维生素的生理功能，但不能将2，6-二氯酚靛酚还原脱色。（总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定）
2.生物组织提取物和生物体液中常含有其它还原性物质，其中有些在同样的条件下也可使2，6-二氯酚靛酚还原脱色。
3.在生物组织中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。
 

主要试剂

1. 标准抗坏血酸溶液

准确称取10mg 纯抗坏血酸（应为洁白色，发黄则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。
2. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液

准确称取250mg2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3 的热水中，冷却后加水稀释至250ml，滤去不溶物,贮于棕色瓶中冷藏(4℃)约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸标定。
2%草酸溶液，1%草酸溶液。

主要设备

架盘天平， 锥形瓶（100ml），容量瓶，移液管，漏斗，微量滴定管（5ml）等

实验材料

松针、水果或蔬菜。

实验步骤

1.   提取

水洗干净松针或整株新鲜蔬菜（或整个新鲜水果），用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后用天平准确称取松针（或蔬菜水果）约0.5克，放在研钵中，加2% 盐酸5-10毫升，研磨成浆状。滤纸过滤，将滤液滤入50毫升容量瓶中。滤饼可用少量2% 盐酸洗2-3次。最后用2%盐酸溶液稀释到刻度并混匀。

2.   标准液的滴定 准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml（含0.1mg抗坏血酸）置100ml锥形瓶中，加 9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至淡红色，并保持15秒不褪色,即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸(取10ml 1%草酸作空白对照,按以上方法滴定)。
 

3.   样品的滴定

准确吸取滤液两份，每份10毫升分别放入两个锥形瓶（100ml）内，滴定方法同前。另取两份10ml 1%草酸作空白对照滴定。

4.   计算

      维生素C含量（mg/100g样品）=((VA-VB)*C*T*100) / (D*W)

      式中:VA:滴定样品提取液所用染料的平均毫升数

             VB:滴定空白对照所用染料的平均毫升数

               C:样品提取液总的毫升数

               D:滴定时所取样品提取液的毫升数

              W:待测样品的重量（g）

               T:为1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数

注意事项

1. 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。
2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2分钟。因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结果。
3. 滴定所用2，6-二氯酚靛酚的量应在1-4毫升之间，超出或低于此范围，应增减样品液用量或改变提取液稀释度。

4. 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用

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