肺炎支原体的常用实验室诊断方法

隆冬时节，天气转冷，再加上雾霾肆虐，最近儿科病号人满为患，很大一部分人是呼吸道疾病，其中支原体肺炎的发生率高居不下。肺炎支原体每3-7年就会流行一次，根据首都儿科研究所的监控数据，从2015年5月份开始，首都儿研所肺炎患儿的呼吸道标本中，检出肺炎支原体的比率开始升高，目前阳性率已达50%以上，出现肺炎支原体感染暴发流行趋势。

肺炎支原体是儿童及青少年社区获得性肺炎的重要致病菌之一，由于肺炎支原体感染的临床症状并不典型，无法与其他肺炎相区别，因此支原体肺炎的诊断主要靠实验室检测，常用的方法包括：支原体培养、血清学方法及分子诊断方法。

标本采集

肺炎支原体检测常用的标本包括：鼻咽拭子、口咽拭子、痰、组织、支气管灌洗液、脑脊液等。

采样时应注意尽量采用带塑料柄的尼龙拭子、涤纶拭子、植绒拭子或人造棉拭子，而不要采用带木柄的棉花拭子，因为后者可能含有抑制支原体生长及抑制分子反应的成分。

支原体培养

肺炎支原体培养通常采用SP4培养基，有液体和固体两种。在液体培养基中加有酚红，肺炎支原体水解葡萄糖使培养基pH值发生变化从而使培养基颜色发生变化。在固体培养基上，肺炎支原体呈典型的油煎蛋样菌落，培养法由于需要时间较长，很少用于临床诊断。

优点：1. 特异性高，阳性结果意味着100%的特异性；2. 能获得致病菌株，可以进一步用于分型或药敏试验；3. 有商品化的培养基（SP4培养基）。

缺点：1. 由于支原体生长缓慢，培养时间较长，通常需要数天至数周；2. 对操作者技术要求较高；3. 敏感性较差，培养阳性率低。

血清学方法

血清学检测方法是肺炎支原体诊断和流行病学调查的主要方法，检测的抗体包括IgM和IgG两种。通常在感染后1周可以测到肺炎支原体抗体，3-6周抗体滴度达到高峰，然后开始下降。急性期IgG抗体的阳性率小于50%，恢复期IgG抗体阳性率可以达到82%。同样，在儿童患者中，急性期IgM抗体的敏感性仅为31.8%，但利用急性期好恢复期双份血清检测时，IgM抗体的敏感性可以增加到88.6%。因此单独的一次血清学检测存在漏诊的风险，恢复期与急性期相比抗体滴度升高4倍或以上有诊断意义。

优点：1. 有商品化试剂盒应用；2. 可以进行半定量的检测；

缺点：1. 特异性较差，有可能出现假阳性；2. 通常需要急性期和恢复期双份血清才能确诊；3. 样本周转时间较长，可能会影响临床的诊断及治疗；4. 部分病人IgM抗体持续阴性或者IgG抗体持续增高会影响诊断。

分子诊断方法

最常用的分子诊断方法为PCR技术，针对肺炎支原体的ATP酶基因序列，P1粘附素基因序列及16SrRNA的保守区域等设计引物进行PCR扩增。同时实时定量PCR也可用于肺炎支原体的检测，与普通PCR相比，可以缩短样本周转时间，减少电泳等步骤。

优点：1. 有商品化试剂盒应用；2. 高灵敏度高特异性；3. 检测速度快，样本周转时间短，利于临床诊断及治疗； 4. 可以对支原体菌株进行分子分型。

缺点：1. 价格比较贵；2. 需要特殊的设备和技术；3. 检测没有标准化，缺乏临床比较验证。

总    结

多种检测方法联合应用可以提高检测的敏感性及特异性，但是由于各种方法的敏感性及特异性不同，当同时应用两种或两种以上方法时，可能会出现各种方法间结果并不相符，例如：免疫力低下的病人，不能产生正常的免疫反应，可能会出现PCR阳性，而血清学阴性。这个时候需要进一步联系临床，根据病人的临床症状结合实验室检测结果，做出正确的诊断。