肿瘤动物模型建立实验（一）

一、肿瘤动物模型建立的意义：

（1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效；

（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；

（3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台；

（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。

二、诱发性肿瘤动物模型

实验方法原理:诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

实验材料：肿瘤细胞、小鼠性

试剂、试剂盒：无血清培养基质、3%中性甲醇、石蜡

仪器、耗材：低温离心机、血球计数器、游标卡尺

实验步骤：

1、肝癌

（1）二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌

① 取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；

② 按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；

③ 共约4个月可诱发成肝癌；

④ 也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

（2）4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌

① 用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2 不应超过1.5～2 mg/kg；

② 4～6月就有大量的肝癌诱发成功。

（3）2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌

① 给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；

② 每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。

（4）二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌

① 用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；

② 6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

（5）亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌

① 用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。

② 实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

③ 或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。

（6）黄曲霉素诱发大鼠肝癌

每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。 

2、胃癌

（1）甲基胆蒽诱发小鼠胃癌

① 取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。

② 含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05～0.1 g 20-甲基胆蒽内浸入10～20根线。

③ 手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。

（2）不对称亚硝胺诱发小鼠胃癌

剂量为0.25 ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月后有85～100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。

（3）甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌

给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素，剂量为2 mg/kg体重，每周饮用5次，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。 

3、食管癌

（1）甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌

① 取体重100 g以上的Wistar大鼠；

② 任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75～1.5 mg/kg体重；

③ 80～100天可诱发成食管癌。

（2）二烃黄樟素（Dihydrosafrole）诱发大鼠食管癌

二烃黄樟素是一种制备啤酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000 ppm）黄樟素，就能引起20～75%的食管癌。

（3）甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌

① 用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1 mg/kg体重；

② 至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管癌， 11个月食管癌的发生率为53%。 

4、肺癌

（1）二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌

① 小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56 mg/kg，DEN总剂量达到868 mg；

② 观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。

③ DEN总剂量达到1176 mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。

（2）乌拉坦诱发肺腺癌

① 小鼠（A系， 1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3 ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约为 100 mg；

② 注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。

（3）苯并芘诱发肺腺癌

① 猴气管内注入3，4-苯并芘（苯并花为3～15 mg与等量之Fe₂O₃混合液），每周一次，共10次；

② 6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。 

（4）硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌

① 用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入；

② 13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。

（5）甲基胆蒽诱发肺腺癌

① 用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入，每次0.1 ml（含甲基胆蒽 5 mg）每周一次，共6次；

② 53周后有62.5%动物发生了肺癌。